[發(fā)明專利]一種提取液及其在保存組織或細(xì)胞、提取RNA中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910102527.8
• 申請(qǐng)日: 2019-02-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109593756B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙偉;廖東升;趙仲玖;邱坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都導(dǎo)勝生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 成都中絡(luò)智合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51300
• 代理人: 喻依豐

本發(fā)明公開(kāi)了一種提取液，包括提取液A和提取液B；其中提取液A應(yīng)用在用于保存組織或細(xì)胞；所述提取液A包括1.2?2.0mol/L的硫氰酸胍和0.5?1.5mol/L的鹽酸胍；所述提取液B包括以體積分?jǐn)?shù)計(jì)的30?65vt％的水飽和苯酚和9?15vt％的甘油，余量為溶劑；提取液B還包括以摩爾濃度計(jì)的0.20?1mol/L的硫氰酸胍、0.4?0.8mol/L的硫氰酸銨和0.0073?0.018mol/L的表面活性劑；所述提取液A和提取液B的pH均為3.5?4.5。而所述提取液B應(yīng)用在提取RNA中。本發(fā)明提取液中的各組分配比設(shè)計(jì)合理，相互之間協(xié)同作用，使得提取的RNA純度高、收率高，且蛋白污染低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取液和該提取液在保存組織或細(xì)胞、提取RNA中應(yīng)用。

背景技術(shù)

現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、臨床分子診斷中常常要從組織和細(xì)胞中分離和純化RNA，而RNA的質(zhì)量高低常常會(huì)影響cDNA庫(kù)、RT-PCR和Northern Blot等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的成敗。

現(xiàn)在常用的方法是先通過(guò)組織保護(hù)液對(duì)組織進(jìn)行保護(hù)，再采用提取液對(duì)組織或細(xì)胞中的RNA進(jìn)行提取。常用的保護(hù)方式包括液氮保護(hù)和保護(hù)液保護(hù)，所述常用保護(hù)液包括RNA later試劑和RNA safety試劑。

其中，液氮保護(hù)方式不僅所需條件苛刻，且成本較高，僅適合臨時(shí)性的組織保護(hù)。而保護(hù)液通常也需要在低溫下進(jìn)行貯藏，且其中RNA later溶液與TRIzol、硅膠柱和磁珠法的化學(xué)成分不兼容，RNA later溶液中含有異硫氰酸銨，當(dāng)組織塊從RNA later溶液中取出用于提取RNA時(shí)，若未將組織塊上帶有的RNA later溶液清洗干凈，則RNA later溶液中的異硫氰酸銨會(huì)與提取液中的酚、SDS結(jié)合或反應(yīng)生成沉淀，導(dǎo)致提取液成分和濃度改變，裂解不徹底，降低RNA的純度和收率。因此，采用RNA later溶液保存的組織或細(xì)胞在提取前通常需要進(jìn)行反復(fù)地清洗，浪費(fèi)時(shí)間和人力，降低提取效率。

而提取RNA則常常采用TRIzol法、硅膠柱和磁珠法等，但這些方法普遍存在RNA收率低、雜質(zhì)污染嚴(yán)重的問(wèn)題，不能滿足后續(xù)基因診斷、生物芯片分析、基因表達(dá)分析等實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量要求。

此外，組織塊的破碎過(guò)程也極大的影響著RNA的質(zhì)量。常用組織塊的破碎方法包括液氮研磨法、勻漿法(手工勻漿、機(jī)器勻漿、超聲勻漿)和反復(fù)凍融法。液氮研磨法需要的組織塊較大，且較難將組織塊徹底打碎；勻漿法較難徹底抑制內(nèi)源性RNA酶活性，容易造成內(nèi)源性降解；反復(fù)凍融法的缺點(diǎn)也是難以徹底裂解大塊組織，且內(nèi)源性RNA酶活性難以抑制。因此，對(duì)動(dòng)物源性組織塊的RNA提取存在操作復(fù)雜、破碎不完全、內(nèi)源性RNA活性難于抑制等困難，造成RNA的提取質(zhì)量及產(chǎn)量難以保障。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)通過(guò)現(xiàn)有的溶液保存與現(xiàn)有的提取液相互不兼容造成其需要反復(fù)清洗導(dǎo)致效率較低的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種提取液和該提取液在保存組織或細(xì)胞、提取RNA中應(yīng)用。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種提取液，包括1.2-2.0mol/L的硫氰酸胍和0.5-1.5mol/L的鹽酸胍，提取液的pH為3.5-4.5。

所述的一種提取液在保存組織或細(xì)胞中的應(yīng)用。首先，本發(fā)明的提取液主要成分為硫氰酸胍和鹽酸胍，所述硫氰酸胍是一種有機(jī)化合物，分子式為C₂H₆N₄S，主要用于生物醫(yī)藥，化學(xué)試劑等。

同時(shí)硫氰酸胍為解偶劑、強(qiáng)力蛋白質(zhì)變性劑、破壞蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)；主要起細(xì)胞裂解作用，促進(jìn)核蛋白和核酸分離；以及起著酶抑制劑作用，具有保存組織效果。