[發(fā)明專利]一種化學(xué)發(fā)光法檢測半乳糖凝集素-3的試劑盒及使用方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910100999.X
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號(hào): CN111505304A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 常青俠;艾冰花;王立杰;趙京超;陳蒙蒙;焉麗波
• 申請（專利權(quán)）人: 艾維可生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 深圳盛德大業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44333
• 代理人: 賈振勇

本發(fā)明適用于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種化學(xué)發(fā)光法檢測半乳糖凝集素?3的試劑盒，其特征在于，包括：包被有抗Galectin?3單克隆抗體的發(fā)光板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測用抗Galectin?3單克隆抗體溶液、標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀釋液、濃縮洗滌液、發(fā)光液A、發(fā)光液B、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液以及檢測抗體稀釋液。本發(fā)明實(shí)施例提供的試劑盒靈敏度較高、均一性良好，穩(wěn)定性高、特異性好，可實(shí)現(xiàn)對臨床血清樣本中Galectin?3的快速定量檢測，以滿足判斷心力衰竭嚴(yán)重程度，分期或預(yù)測疾病后果，或監(jiān)視用藥效果等臨床或科研需要。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種化學(xué)發(fā)光法檢測半乳糖凝集素-3的試劑盒。

背景技術(shù)

心力衰竭是由于心臟結(jié)構(gòu)或功能異常導(dǎo)致心室充盈和(或)射血能力障礙為特征的一種臨床綜合征。臨床主要表現(xiàn)為呼吸困難、乏力以及水鈉潴留(肺淤血、外周水腫)。調(diào)查顯示，心力衰竭已成為我國心血管疾病首要死亡原因(59％)，因此探索診斷心力衰竭的新的生化標(biāo)志物檢測指標(biāo)具有重要意義。在心室重構(gòu)中，心臟和心臟以外組織器官分泌的一些物質(zhì)與心力衰竭的進(jìn)展和不良預(yù)后密切相關(guān)，有的甚至起著決定性作用。因此尋找精確、有效的標(biāo)志物來診斷心力衰竭，對心力衰竭患者的預(yù)后具有重要臨床價(jià)值。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)是近年來發(fā)現(xiàn)的新興標(biāo)志物，他們可以對傳統(tǒng)標(biāo)志物，比如B型利鈉肽(BNP)等診斷心力衰竭具有一定的補(bǔ)充作用，可為臨床對心力衰竭的危險(xiǎn)評(píng)估和精確評(píng)估提供一些線索。

Galectins，即β-半乳糖血凝素超家族，是一類鈣非依賴性的糖結(jié)合蛋白，具有高度保守性。目前，已發(fā)現(xiàn)該家族有14個(gè)成員，根據(jù)發(fā)現(xiàn)的先后順序依次編號(hào)為1-14。Galectins家族的每個(gè)成員都具有以下特性：(1)具有特征性的氨基酸序列：每個(gè)Galectin家族成員至少包含一個(gè)由約130個(gè)氨基酸組成的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域(CRD)；(2)具有對β-半乳糖苷的親和性。根據(jù)Galectins的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，可以將其分為3組：(1)原型，即含有一個(gè)CRD的單體，以單體(Galectin-5，-7，-10)或二聚體(Galectin-1，-2，-11，-13，-14)的形式存在；(2)嵌合體型，由一個(gè)糖基與一個(gè)非糖基配體交聯(lián)結(jié)合而成(Galectin-3)；(3)串聯(lián)重復(fù)型，由兩個(gè)CRD串聯(lián)融合而成(Galectin-4，-6，-8，-9，-12)。

Galectin-3，是Galectins家族唯一的嵌合體成員，由一個(gè)糖基與一個(gè)非糖基配體交聯(lián)結(jié)合而成，分子量為32KD，在人類基因組中由單個(gè)基因編碼，位于14號(hào)染色體q21-22位點(diǎn)，總長約17KD。Galectin-3包括3個(gè)結(jié)構(gòu)域，NH2末端結(jié)合域，即1個(gè)糖結(jié)構(gòu)識(shí)別域和1個(gè)特有的富含甘氨酸、脯氨酸和酪氨酸重復(fù)序列的結(jié)構(gòu)域；NH2末端結(jié)合域包括控制細(xì)胞靶向的12個(gè)氨基酸殘基，為與具有糖軛合物的細(xì)胞表面結(jié)合時(shí)發(fā)揮多種功能所必需；羧基末端的糖結(jié)合域可被胰蛋白酶裂解為包含140個(gè)氨基酸殘基的糖結(jié)構(gòu)識(shí)別域。

作為一種多功能的蛋白，Galectin-3廣泛分布于心臟、腎臟、肝臟、肺臟以及腸道等組織器官以及成骨細(xì)胞、上皮細(xì)胞和腸組織等各種組織和細(xì)胞中，并在激活的巨噬細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等血液細(xì)胞中高表達(dá)。根據(jù)細(xì)胞類型，Galectin-3可存在于細(xì)胞漿、細(xì)胞核、細(xì)胞膜或細(xì)胞外基質(zhì)，其在細(xì)胞內(nèi)的分布依賴于細(xì)胞的增值狀態(tài)。在靜止期細(xì)胞，Galectin-3主要分布在胞漿；在增殖期細(xì)胞，Galectin-3主要分布在細(xì)胞核。Galectin-3可通過非經(jīng)典分泌途徑分泌到細(xì)胞外，與細(xì)胞表面受體和糖蛋白相互作用，參與跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

Galectin-3可參與細(xì)胞生長、細(xì)胞黏附、細(xì)胞凋亡、炎性反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、新血管形成、腫瘤分化轉(zhuǎn)移等各種生理和病理過程。研究表明，Galectin-3作為一種重要的促有絲分裂原能在旁分泌方式下通過凝集素-碳水化合物相互作用來刺激肌成纖維細(xì)胞的增值和膠原合成。Galectin-3表達(dá)與上皮細(xì)胞以及包括巨噬細(xì)胞，嗜中性細(xì)胞和肥大細(xì)胞等在內(nèi)的免疫細(xì)胞相關(guān)。Galectin-3參與心力衰竭(HF)相關(guān)的多種重要的生物學(xué)過程，如肌成纖維細(xì)胞增生、纖維化、組織修復(fù)、心臟重塑和炎癥反應(yīng)等。