[發明專利]安宮牛黃丸的UPLC指紋圖譜構建方法和檢測方法

有效

• 申請號: 201910097941.4
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109633037B
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發明（設計）人: 葉文才;柴玉爽;范春林;何源峰;曾瑚瑚;寧娜;蘇碧茹;張春波;尹震
• 申請（專利權）人: 廣州白云山中一藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 向薇

1.一種安宮牛黃丸的UPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

對照品溶液制備：取梔子苷對照品，加甲醇溶解，得所述對照品溶液；

供試品溶液制備：取安宮牛黃丸樣品，加入體積濃度為70~80%的甲醇水溶液超聲提取，濾過，取續濾液，得所述供試品溶液；

指紋圖譜構建：將所述對照品溶液和供試品溶液分別注入超高效液相色譜儀中，測定，即得所述指紋圖譜；其中所述超高效液相色譜儀采用的洗脫方式為：以體積濃度為0.08~0.12%的甲酸水溶液為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；所述梯度洗脫的方法為：

0-6min，流動相B的體積分數由10%上升至25%；

6-22 min，流動相B的體積分數由25%上升至46%；

22-24min，流動相B的體積分數由46%上升至60%；

24-30min，流動相B的體積分數由60%上升至95%；

所述超高效液相色譜儀的條件包括：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，柱溫為28~32℃；所述流動相的流速為0.38~0.42mL/min；檢測波長為254nm；所述色譜柱的規格為2.1×100 mm，填料粒徑為2.7μm；

構建獲得的安宮牛黃丸的UPLC指紋圖譜在30min內共標定了25個共有峰，其中包含對羥基苯甲酸、京尼平龍膽雙糖苷、梔子苷、格蘭地新、黃連堿、表小檗堿、藥根堿、小檗堿、巴馬汀、對羥基苯甲酸乙酯、黃芩苷、白楊素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、千層紙素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A。

2.根據權利要求1所述的安宮牛黃丸的UPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于，所述色譜柱為Poroshell 120 EC-C18柱。

3.根據權利要求1或2所述的安宮牛黃丸的UPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于，所述供試品溶液制備中，所述超聲提取的時間為50~70min；所述超聲提取的功率為350~450W，頻率為35~45kHZ。

4.根據權利要求1或2所述的安宮牛黃丸的UPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于，所述供試品溶液制備中，所述體積濃度為70~80%的甲醇水溶液的用量為每g安宮牛黃丸樣品加入40~60mL。

5.一種安宮牛黃丸的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

待測樣品溶液制備：取待測安宮牛黃丸，加入體積濃度為70~80%的甲醇水溶液超聲提取，濾過，取續濾液，得所述待測樣品溶液；

檢測：將所述待測樣品溶液注入超高效液相色譜儀中，測定，即可；其中所述超高效液相色譜儀采用的洗脫方式為：以體積濃度為0.08~0.12%的甲酸水溶液為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；所述梯度洗脫的方法為：

0-6min，流動相B的體積分數由10%上升至25%；

6-22 min，流動相B的體積分數由25%上升至46%；

22-24min，流動相B的體積分數由46%上升至60%；

24-30min，流動相B的體積分數由60%上升至95%；

所述超高效液相色譜儀的條件包括：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，柱溫為28~32℃；所述流動相的流速為0.38~0.42mL/min；檢測波長為254nm；所述色譜柱的規格為2.1×100 mm，填料粒徑為2.7μm。

6.根據權利要求5所述的安宮牛黃丸的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱為Poroshell 120 EC-C18柱。

7.根據權利要求5或6所述的安宮牛黃丸的檢測方法，其特征在于，所述待測樣品溶液制備中，所述超聲提取的時間為50~70min；所述超聲提取的功率為350~450W，頻率為35~45kHZ。

8.根據權利要求5或6所述的安宮牛黃丸的檢測方法，其特征在于，所述待測樣品溶液中，所述體積濃度為70~80%的甲醇水溶液的用量為每g待測安宮牛黃丸加入40~60mL。