[發明專利]基于銀離子和半胱氨酸的電化學傳感器的制備方法及其邏輯門應用

在審

• 申請號: 201910096692.7
• 申請日: 2019-01-21
• 公開（公告）號: CN109613094A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 胡宇芳;張青青;胡丹丹;馬少華;郭智勇;王邃
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.基于銀離子和半胱氨酸的電化學傳感器的制備方法及其邏輯門應用，其特征在于，機理如下：利用單鏈DNA上的巰基與Au通過金硫鍵結合，TdT催化DNA的3’-OH末端進行聚合延長，制備富C DNA長鏈，利用導致i-motif形成的Ag(I)和堆疊到i-motif表面的GV，成功制備傳感器，而Cys可以破壞i-motif的形成，從而導致結果相反，Ag(I)和Cys的有無影響傳感器的電化學響應。

2.基于銀離子和半胱氨酸的電化學傳感器的制備方法及其邏輯門應用，具體步驟如下：

(1)傳感器的制備

a.Electrode 1的制備

在干凈且活化好的裸金電極(Au)表面滴加巰基DNA溶液(5～10μL，0.05～0.75μM)，4℃冰箱靜置6～12h，蒸餾水沖洗，巰基乙醇(MCH，5～10μL，0.1～1.0mM)處理30～50min，然后蒸餾水緩緩沖洗，標記為Electrode 1。

b.Electrode 2的制備

配制5～15μL TdT反應液：取2～6μL蒸餾水，0.5～1.5μL 5×TdT緩沖液，dCTP(0.25～1.25μL，2.5～12.5mM)和TdT(0.25～1.25μL，2.5～12.5U/mL)，混合均勻，滴于Electrode 1表面，在28～40℃下放置0.5～2h，蒸餾水緩緩沖洗電極，標記為Electrode 2。

c.Electrode 3的制備

向Electrode 2表面滴加AgNO₃溶液(2.5～7.5μL，0.5～1.5μM)，室溫孵育15～30min，蒸餾水緩緩沖洗電極，標記為Electrode 3。

d.Electrode 4傳感器的制備

向Electrode 3表面滴加GV溶液(2.5～7.5μL，0.5～1.5mM)，室溫反應15～30min，蒸餾水緩緩沖洗電極，標記為Electrode 4，于磷酸緩沖溶液(PBS，0.1M，pH 7.0)中檢測電化學響應。

(2)Ag(I)和Cys的檢測

在Electrode 3的制備過程中，改變Ag(I)濃度，用于Electrode 3制備，然后如步驟(1)制備一系列傳感器，用來檢測不同濃度Ag(I)的電化學響應。

在Electrode 4的制備過程中，滴加GV溶液后，加入Cys，改變Cys濃度，用于Electrode4的制備，然后如步驟(1)制備一系列傳感器，用來檢測不同濃度Cys的電化學響應。

3.根據權利要求1和權利要求2所述的電化學傳感器的制備，其特征在于：所用電化學方法為方波伏安法，電位范圍為-0.6～-0.78V。

4.根據權利要求1～3所述的電化學傳感器，可以實現不同濃度Ag(I)和Cys的檢測及其禁止邏輯門的應用。