[發明專利]他汀類藥物不良反應基因型多態性的PCR引物組合及應用

在審

• 申請號: 201910095443.6
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109536605A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 劉文蘭;葉秀峰;徐跡;李赟;黃建林
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所 53113
• 代理人: 陳娟

本申請公開了一種他汀類藥物不良反應基因型多態性的PCR引物組合及應用,屬于生物醫學分子檢測技術領域。所述PCR引物組合包括用于擴增SNP位點rs4149056、rs2306283、rs429358、和rs7412的引物對1—4，其序列如SEQ ID No.1?2、5?6、11?12、13?14所示；還包括特異擴增所述SNP位點的單堿基延伸引物組合，其序列如SEQ ID No.17—20所示。本申請提供的引物組合及檢測方法，解決了多個靶點擴增條件不兼容的技術問題，實現一個反應孔內加入多個引物，且互不干擾的效果，檢測他汀類藥物安全性及療效的不同基因上4個突變位點基因型時，最低檢測限可達0.01ng/μL。

技術領域

本發明屬于生物醫學分子檢測技術領域，具體涉及用于檢測四個SNP位點：SLCO1B1基因*5c.521T＞C(rs4149056)、SLCO1B1基因c.388A＞G(rs2306283)、ApoE基因c.388T＞C(rs429358)、和ApoE基因c.526C＞T(rs7412)的核苷酸多態性的檢測引物及其應用。

背景技術

他汀類藥物(3-羥基-3-甲基戊二酸-輔酶A還原酶抑制劑)是一類用來降低膽固醇(LDL-C)的藥物，通過抑制肝臟內膽固醇合成關鍵酶——羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-CoA還原酶)，使肝臟合成膽固醇減少、從血液移除多余的膽固醇。他汀類藥物除具有降脂作用外，還表現出降低全身炎癥、改善內皮功能和降低血小板高反應性等多效性作用，可明顯降低所有患者心血管疾病所引發的心肌梗死、卒中和死亡風險及高危患者的全因死亡風險，作為無癥狀人群的一級預防用藥，目前全世界有超過兩億人長期服用此類藥物。

然而研究發現，他汀類藥物具有以下潛在危害，最嚴重的不良反應為橫紋肌溶解，當肌酸激酶超過正常上限40倍以上，可引發腎衰竭；受藥物劑量和效能的影響，他汀類具有對特定人群的療效不佳或無療效的風險。由此可見，因個體差異使用他汀類藥物潛在風險巨大，僅憑經驗醫學及保守性治療，很難做到用藥方案的個體化和針對性。

使用他汀類藥物不良反應基因型檢測可以指導臨床醫生提前對患者的風險評估、危害分層以及合理地選擇用藥，制定更合適的治療方案，并提前預測患者個體對他汀類藥物的敏感性和不良反應的發生風險，降低醫保藥物支出、減少患者經濟負擔、以取得更好的治療收益。

由SLCO1B1基因編碼有機陰離子轉運多肽(OATP1B1)，在他汀類藥物代謝中，負責將血液中的藥物轉移至肝臟中，直接發揮藥效或代謝轉化為有活性的物質。研究表明SLCO1B1基因具有遺傳多態性，其中388A>G、521T>C是兩種常見的單核苷酸多態性，可以形成4種單倍型：SLCO1B1*1a(388A-521T)、SLCO1B1*1b(388G-521T)、SLCO1B1*5(388A-521C)、SLCO1B1*15(388G-521C)。突變型SLCO1B1基因引起編碼的OATP1B1轉運蛋白活力減弱，表現為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發生風險。

ApoE(載脂蛋白E)多態性被認為是高脂蛋白血癥及動脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因。人類ApoE基因定位于19號染色體上，主要有兩種單核苷酸多態性526C>T和388T>C，可以形成3種單倍型ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。文獻報道，ApoE4攜帶者患冠心病的風險要高40％，并且他汀類藥物對ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效，而對ApoE2攜帶者的降脂作用最強。最近的全基因組關聯研究(GWAS)證實，ApoE基因位點與對瑞舒伐他汀的應答相關。

目前常用的基因檢測方法有DNA直接測序，核酸質譜技術、限制性片段長度多態性分析、高分辨率溶解曲線、基因芯片、液相芯片、熒光定量PCR等，公認的基因突變金標準是測序技術，但檢測成本高、周期長、通量低，此外對實驗室人員技術要求高、結果判斷步驟繁瑣等，難以形成商業化產品。