[發明專利]一種合成2’-巖藻糖基乳糖的重組枯草芽孢桿菌及其構建方法與應用有效
| 申請號： | 201910093684.7 | 申請日： | 2019-01-30 |
| 公開（公告）號： | CN109735479B | 公開（公告）日： | 2022-04-01 |
| 發明（設計）人： | 劉龍;鄧潔瑩;陳春梅;呂雪芹;李江華;堵國成;陳堅 | 申請（專利權）人： | 光明乳業股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/75;C12P19/12;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京東正專利代理事務所(普通合伙) 11312 | 代理人： | 蔡仲德 |
| 地址： | 201103 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 合成 巖藻糖基 乳糖 重組 枯草 芽孢 桿菌 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種合成2'-巖藻糖基乳糖的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述重組枯草芽孢桿菌是通過在枯草芽孢桿菌168的基因組中強化表達乳糖運輸酶基因，并表達外源巖藻糖基轉移酶、巖藻糖激酶和磷酸鳥嘌呤基轉移酶基因得到的，其中，將P43啟動子和乳糖運輸酶基因替換枯草芽孢桿菌168的淀粉酶基因amyE位點，所述乳糖運輸酶基因是大腸桿菌乳糖運輸酶基因lacY。
2.根據權利要求1所述的合成2'-巖藻糖基乳糖的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，巖藻糖激酶和磷酸鳥嘌呤基轉移酶基因來源于脆弱擬桿菌，巖藻糖基轉移酶來源于幽門螺旋桿菌。
3.一種權利要求1所述的合成2'-巖藻糖基乳糖的重組枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于，該構建方法包括以下步驟：
（1）構建包含淀粉酶基因amyE位點的上下游序列、大腸桿菌乳糖運輸酶基因lacY、P43啟動子和博來霉素抗性基因序列的替換框，將構建好的替換框轉化枯草芽孢桿菌168，通過驗證，確認大腸桿菌乳糖運輸酶基因lacY強化表達成功，得到重組枯草芽孢桿菌；所述替換框的序列如SEQ ID NO.1所示；
（2）構建包含巖藻糖基轉移酶、巖藻糖激酶和磷酸鳥嘌呤基轉移酶基因的重組質粒，將構建好的重組質粒轉化步驟（1）的重組枯草芽孢桿菌，通過驗證，確認巖藻糖基轉移酶、巖藻糖激酶和磷酸鳥嘌呤基轉移酶表達成功，得到重組枯草芽孢桿菌。
4.根據權利要求3所述的合成2'-巖藻糖基乳糖的重組枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于，步驟（1）中，將構建好的替換框電轉化枯草芽孢桿菌168的感受態細胞，替換框的添加量為100-300ng。
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