[發明專利]一種響應面法優化烏拉草總黃酮的提取工藝及其抗氧化用途

有效

• 申請號: 201910092936.4
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109674917B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 周鴻立;王洪彪;晏自強
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: A61K36/89
• 分類號: A61K36/89;A61P39/06;G16C20/10
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本發明提供一種響應面法優化烏拉草總黃酮的提取工藝及其抗氧化功能。利用乙醇濃度、液料比、提取時間及提取溫度為單因素，總黃酮的提取率（%）為響應值，通過響應面設計試驗對提取工藝進行優化，得到最佳工藝為乙醇濃度49.40%，液料比30.49 mL/g，提取時間91 min，提取溫度71℃，最高提取率為6.248%，烏拉草總黃酮的實際提取率為6.24%±0.04%；運用LC?MS聯用進行定性分析，推測烏拉草中可能含兒茶素、蘆丁、葒草苷、木樨草素?7?o???D?葡萄糖醛酸和木犀草素等5種化合物；并對總黃酮抗氧化活性進行研究，發現其具有一定的清除羥基、ABTS和DPPH自由基的清除能力，IC₅₀分別為0.232、0.012、0.026mg/mL，說明具有較為顯著的抗氧化能力。

技術領域

本發明屬于植物提取技術領域，涉及一種響應面法優化提取烏拉草總黃酮的方法及其抗氧化方面的用途。

背景技術

烏拉草（Carex meyeriana Kunth）是多年生草本植物,莎草科薹草屬（Carex L.），主要生長在黑龍江、吉林、內蒙古、四川等地，與當地的人參、貂皮并稱為“東北三寶”，能夠主動吸附濕氣，具有良好的吸附能力，自身卻不易受到侵蝕，使其一年四季均可使用。據文獻記載，烏拉草擁有有奇特的保暖功能以及透氣、防寒、抑菌等功能。將烏拉草本身作為鞋內襯墊物的歷史可以追述到幾百年前，以前，東北地區的居民用經常動物皮毛制鞋，將處理后的烏拉草內絮于鞋內，制作防寒鞋，其是北方貧苦人民十分鐘愛的“草履”。每年秋季，他們便到山上采摘烏拉草，曬干后儲存，到冬天時塞到鞋里，可用于保暖，避免腳凍傷后生出凍瘡。現已經廣泛應用于纖維制品的制作，也適于腳癬、腳氣等各種腳部疾病的的預防和治療。但對其化學成分和機理的研究較少。植物中常見的化學成分為黃酮、多糖、生物堿和皂苷等化學成分。

文獻報道天然產物中黃酮化合物的提取方法主要有熱回流提取、超聲波輔助提取、微波輔助提取、酶輔助提取，超臨界流體萃取以及雙水相體系萃取等提取方法，其中最常見的提取方法有乙醇提取法和超聲波、微波輔助提取法。黃酮化合物的提取率和化學成分受很多因素的影響，常采用正交實驗法或者響應面分析法來優化提取工藝，確定最佳提取條件。

目前，對烏拉草黃酮化合物的研究較少，余克嬌在2005年對烏拉草的黃酮化合物展開研究，并從烏拉草中首次分離得到木犀草素，為烏拉草的開發與研究奠定了基礎。至今對烏拉草黃酮化合物的研究較少，未見使用響應面分析法對烏拉草總黃酮的提取工藝進行優化及結構和功能方面進行相關報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種響應面法優化提取總黃酮制備的方法及其在抗氧化方面的用途。

為了解決上述技術間題，本發明提供了如下的技術方案：

一種響應面法優化提取烏拉草總黃酮的方法，包括如下步驟：

（1）烏拉草干燥、粉碎，得到烏拉草粉末，過40目藥典篩。

（2）烏拉草粉末用乙醇提取，提取液濃縮干燥，測定干浸膏的總黃酮含量。

（3）選擇乙醇濃度、液料比、提取時間、提取溫度四個因素對步驟（2）進行單因素實驗，確定乙醇濃度、液料比、提取時間、提取溫度的最優水平，以單因素實驗最優點為中心，圍繞最優點上下各取1個水平值作為響應面的水平，分別編碼-1、0、1，根據Bx－Benhnken設計原則進行四因素響應面實驗設計，以乙醇濃度、液料比、提取時間、提取溫度為自變量，以總黃酮含量為響應值，建立總黃酮含量的多元二次方程：

（4）對步驟（3）建立的多元二次方程進行響應面分析，取總黃酮含量為最大值，得出最優的提取條件。

2．根據權利求1所述的方法，其特征在于：在步驟（3）中，以乙醇濃度A、液料比B、提取時間C、提取溫度D四個因素為自變量，以總黃酮含量Y為響應值，建立的多元二次方程為：