[發明專利]基于磷或亞磷酰氧基二苯甲醇及其衍生物及輔助的胸腺五肽液相合成方法

有效

• 申請號: 201910088856.1
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109836455B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 欽傳光;李海迪;晁潔;金雅濤;田廣
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C07F9/32
• 分類號: C07F9/32;C07K7/06;C07K1/02;C07K1/10
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種采用磷酰氧基苯甲醇POB進行基團輔助的胸腺五肽液相的合成方法，其特征在于，步驟如下：

步驟1、輔助基團與氨基酸的偶聯：以輔助基團替代固相多肽合成中的樹脂，在脫水偶聯劑的作用下與氨基酸在0～50℃下攪拌反應1～3小時，得到生成物A；所述氨基酸與POB輔助基團的摩爾比為1～3:1；所述脫水偶聯劑為1︰1摩爾比的脫水偶聯活化劑和堿性物質；

所述輔助基團為磷酰氧基苯甲醇POB，分子結構通式為：

所述氨基酸采用芴甲氧羰基Fmoc保護的酪氨酸Fmoc-Tyr(OtBu)-OH，受保護的酪氨酸Fmoc-Tyr(OtBu)-OH的C-端與POB輔助基團連接，生成化合物A，Fmoc-Tyr(OtBu)-POB；

步驟2、分離純化：向生成物A加入極性小的烷烴或醚類溶劑，借助POB輔助基團在溶劑系統中易結晶沉淀的特性，將生成物A與其他雜質分離；

對分離后的生成物A進行過濾和洗滌或重結晶操作得到純化的生成物A；

步驟3、脫除N-端Fmoc：將純化的生成物A采用脫Fmoc試劑處理，在10～50℃下攪拌反應0.5～2小時得到生成物B，H-Tyr(OtBu)-POB；

向生成物B加入極性小的烷烴或醚類溶劑，借助POB輔助基團在溶劑系統中易結晶沉淀的特性，將生成物B與其他雜質分離；

對分離后的生成物B進行過濾和洗滌或重結晶操作得到純化的生成物B；

步驟4：以純化的含有輔助基團POB的生成物B作為原料，再與芴甲氧羰基(Fmoc)保護的纈氨酸Fmoc-Val-OH進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到化合物H-Val-Tyr(OtBu)-POB；

以第一次重復后純化的生成物H-Val-Tyr(OtBu)-POB作為原料，再與芴甲氧羰基(Fmoc)保護的天門冬氨酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到化合物H-Asp(OtBu)-Val-Tyr(OtBu)-POB；

以第二次重復后純化的生成物H-Asp(OtBu)-Val-Tyr(OtBu)-POB作為原料，再與芴甲氧羰基(Fmoc)保護的賴氨酸Fmoc-Lys(Boc)-OH進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到化合物

H-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr(OtBu)-POB；

以第三次重復后純化的生成物H-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr(OtBu)-POB作為原料，再與芴甲氧羰基(Fmoc)保護的精氨酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH進行偶聯反應；重復步驟1～步驟3，得到胸腺五肽的前體化合物C，即H-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr(OtBu)-POB；

步驟5、側鏈脫保護與POB輔助基團的剪除：以三氟乙酸的雞尾酒溶液為側鏈脫保護劑，反應條件為5～30℃下，攪拌1～3小時，脫除側鏈上的保護基團tBu、Boc和Pbf，同時剪除POB輔助基團，經分離純化得到胸腺五肽的三氟乙酸鹽，[TFA*H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH]；所述三氟乙酸的雞尾酒溶液中的組分比例為：TFA/TIPS/H₂O＝95:2.5:2.5；

步驟6、胸腺五肽的分離純化：將三氟乙酸通過旋蒸回收，殘留溶液用碳酸氫鈉中和，調節pH＝8～9，用乙酸乙酯萃取并與水相分離，合并乙酸乙酯，沉淀析出，經過濾、乙酸乙酯洗滌，干燥得到純化的胸腺五肽(TP-5)，[H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH]。

2.一種權利要求1所述方法制備過程中得到的脫Fmoc保護酪氨酰-POB化合物，其特征在于：所述H-Tyr(OtBu)-POB的分子結構通式為：

3.一種權利要求1所述方法制備過程中得到的Fmoc保護纈氨酰-酪氨酰-POB化合物，其特征在于：所述Fmoc-Val-Tyr(OtBu)-POB分子結構通式為：

4.一種權利要求1所述方法制備過程中得到的脫Fmoc保護纈氨酰-酪氨酰-POB化合物的結構通式，其特征在于：所述H-Val-Tyr(OtBu)-POB分子結構通式為：