[發明專利]羔羊睪丸支持細胞永生化細胞系及其建立方法和應用

有效

• 申請號: 201910087613.6
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN109837250B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 張志東;王光祥;王艷華;秦曉東;李彥敏;楊能能;賈寧;蘇雅杰
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N7/00;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種羔羊睪丸支持細胞永生化細胞系及其建立方法和應用。所述的羔羊睪丸支持細胞永生化細胞系，命名為羔羊睪丸支持細胞永生化細胞系hTERT?LSC，其保藏編號為CCTCC NO：C2018202。試驗發現，hTERT–LSC細胞系可以連續傳代60代以上，且生長增殖特性保持不變，該細胞系對接種羊痘病毒較為敏感，可以高效增殖羊痘病毒，且可以保證病毒的均一、穩定。用該細胞系所增殖的羊痘病毒滴度與羔羊睪丸支持細胞LSC相當，且細胞分種率高于LSC，分種率可達1:3。同時利用該永生化細胞系來制備疫苗，簡化了生產工藝、縮短了生產周期，降低了生產成本，同時還保證了制備得到的羊痘病毒疫苗的質量穩定。因此，本發明的提出對羊痘病毒疫苗的規?；a提供了新的技術手段。

技術領域

本發明涉及一種永生化細胞系及其建立方法和應用，特別涉及一種羔羊睪丸支持細胞永生化細胞系及其建立方法和在增殖培養羊痘病毒中的應用。本發明屬于細胞工程技術領域。

背景技術

睪丸支持細胞(Sertoli cell,SC)是生精小管基膜上的上皮細胞，為生精細胞的分化、成熟提供支持、能量和營養，被稱為生精細胞的“保姆細胞”。在精子的分化成熟過程中，支持細胞不但向生精上皮傳遞促性腺激素，控制生精細胞的有絲分裂、減數分裂及后續分化一系列動態過程，而且對精細胞具有支持、營養、吞噬、釋放、分泌等多種功能。研究表明睪丸支持細胞能分泌雄激素結合蛋白(androgen binding protein,ABP)、苗勒氏管抑制物質(mullerian inhibiting substance,MIS)、抑制素(inhibin)、激活素(activin)、轉化生長因子β(TGFβ)、胰島素樣生長因子1(IGF1)、白介素1和6(IL1，IL6)、生精生長因子(spermatogenic growth factor,SGF)、神經營養素3(neurotrophin3,NT3)、神經生長因子(nerve growth factor,NGF)、纖溶酶原激活等十多種營養和生長因子，以支持精原細胞的增殖和分化。

羊痘病毒(Capripox virus,CPV)是最重要的動物痘病毒，在分類地位上屬于痘病毒科(Poxviridae)脊椎動物痘病毒亞科(Chordopoxrinae)中的羊痘病毒屬(Capripoxvirus)成員，包括山羊痘病毒(Goatpox virus,GTPV)、綿羊痘病毒(Sheep poxvirus,SPPV)和牛結節疹病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)。羊痘是由羊痘病毒引起的一種急性、接觸性傳染病，被世界動物衛生組織(FAO/OIE)列為93種必須報告的動物疫病之一，我國將其列為一類傳染病。其發病率可達75％以上，死亡率可達50％以上，羔羊死亡率可達100％，同時還可導致母羊流產。羊痘是古老的疾病之一，1879年Hansen首次報道了挪威的山羊痘。后來，陸續在世界其他地區報道了該病。該病廣泛分布于非洲、中東、印度次大陸、北歐、地中海各國及德國、澳大利亞、美國等，特別是非洲北部、中東和亞洲的部分國家流行較為嚴重。與我國接壤的周邊國家，如印度、孟加拉、尼伯爾、巴基斯坦、俄羅斯、蒙古等不少國家均有本病的流行。近幾年我國的江蘇、廣東、貴州、山東、浙江、廣西、甘肅、黑龍江等地均有本病流行。該病的爆發和流行使家畜的生產力下降，活畜及畜產品貿易停滯，給養羊業的發展造成極大的經濟損失。