[發明專利]用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法及相應試劑盒

在審

• 申請號: 201910085502.1
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN111485028A
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 唐偉;束文圣;楊榮;束浩然;黃斌;蔣華
• 申請（專利權）人: 廣東美格基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、收集樣品；

S2、提取基因組DNA；

S3、利用熒光定量PCR檢測羅非魚無乳鏈球菌特異性基因16SrRNA、SIP和CFB基因；

S4、讀取擴增Ct值；當所述羅非魚無乳鏈球菌特異性基因中至少1個基因的Ct值小于35時，羅非魚無乳鏈球菌的檢測結果為陽性；當所述羅非魚無乳鏈球菌特異性基因16SrRNA、SIP和CFB基因的Ct值均大于35時，羅非魚無乳鏈球菌的檢測結果為陰性。

2.根據權利要求1所述的用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，所述步驟S2中還包括設計16SrRNA、SIP和CFB基因的檢測引物和TaqMan探針的步驟。

3.根據權利要求2所述的用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，所述羅非魚無乳鏈球菌特異性基因16SrRNA的檢測引物如SEQ ID NO:1～2所示，TaqMan探針序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根據權利要求1所述的用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，所述羅非魚無乳鏈球菌特異性基因SIP的檢測引物如SEQ ID NO:4～5所示，TaqMan探針序列如SEQ ID NO:6所示。

5.根據權利要求1所述的用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，所述羅非魚無乳鏈球菌特異性基因CFB的檢測引物如SEQ ID NO:7～8所示，TaqMan探針序列如SEQ ID NO:9所示。

6.根據權利要求1所述的用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，所述熒光定量PCR檢測的反應體系為25μl，包括2×Taq PCR Mix 12.5μl，total 10uMPrimers Mix 1μl，TaqMan探針0.5μl，DNA input 2μl，H₂O 9μl。

7.根據權利要求1所述的用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR方法，其特征在于，所述熒光定量PCR檢測的反應條件為95℃預變性2min30s，94℃變性15s，60℃退火30s，采集熒光信號，40個循環。

8.一種用于檢測羅非魚無乳鏈球菌的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，包含所述的羅非魚無乳鏈球菌特異性基因16SrRNA、SIP和CFB基因的檢測引物和TaqMan探針。