[發明專利]一種根腫菌漂浮式菌液接種方法

有效

• 申請號: 201910084609.4
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN109652496B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 胡燕;周娜;陶偉林;陸景偉;鄭陽
• 申請（專利權）人: 重慶市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

本發明屬于根腫菌室內接種技術領域，公開了一種根腫菌漂浮式菌液接種方法，將冷凍保存的甘藍腫根取出，室溫解凍，剪成小塊后稱重，加5倍重量的無菌水，用組織搗碎勻漿機攪成勻漿后，6層紗布過濾，調pH＝5～6，利用血球計數板計測勻漿中休眠孢子濃度；將消毒后的種子，播在裝有滅菌基質的漂浮式育苗盤中，將接種液加入漂浮盤中；使混勻后的基質中休眠孢子濃度達10⁸個/g基質，在25℃黑暗條件下保濕48h，進行正常管理。本發明的根腫菌漂浮式菌液接種法針對快捷、均一的接種方式設計，以接種后發病快，品種長勢均一，發病均勻，病情判別靈敏度高，并能正確劃分出品種真實抗病性及操作簡單方便為宗旨。

技術領域

本發明屬于根腫菌室內接種技術領域，尤其涉及一種根腫菌漂浮式菌液接種方法。

背景技術

目前，業內常用的現有技術是這樣的：建立一套穩定的人工病害接種方法是篩選抗根腫病十字花科材料的基礎。現有的根腫菌室內接種方法主要有根際土壤注菌法、拌土法、灌根法、蘸根法等。灌根接種法是待幼苗長至兩葉一心時，在寄主根系周圍灌入根腫菌休眠孢子懸浮液，但缺點是使用的腫根量較大，浪費接種源、操作浪費人力；蘸根接種法是在兩葉一心期，將根系拔出用清水洗凈后，蘸菌懸液接種，雖然可以節省菌源，但操作較復雜；根際土壤注菌法的特點是在播種后在育苗穴內逐個進行單獨注射接種，工作量繁瑣，費時費力；拌土法是將制備好的根腫菌休眠孢子懸浮液，拌入無菌育苗基質中，容易造成基質中接種菌液濃度不均勻，影響統計結果。

綜上所述，現有技術存在的問題是：

(1)灌根接種法是待幼苗長至兩葉一心時，在寄主根系周圍灌入根腫菌休眠孢子懸浮液，但缺點是使用的腫根量較大，浪費接種源、操作浪費人力。

(2)蘸根接種法是在兩葉一心期，將根系拔出用清水洗凈后，蘸菌懸液接種，雖然可以節省菌源，但操作較復雜。

(3)根際土壤注菌法的特點是在播種后在育苗穴內逐個進行單獨注射接種，工作量繁瑣，費時費力。

(4)拌土法是將制備好的根腫菌休眠孢子懸浮液，拌入無菌育苗基質中，容易造成基質中接種菌液濃度不均勻，影響統計結果。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種根腫菌漂浮式菌液接種方法。

本發明是這樣實現的，一種根腫菌漂浮式菌液接種方法，所述根腫菌漂浮式菌液接種方法包括：

第一步，將十字花科根腫病發病田塊采集的發病植株腫根作為供試病原菌、低溫保存備用；再將滅菌蛭石、滅菌草炭、無菌土壤混合，作為供試基質、裝于消毒漂浮式育苗盤備用；

第二步，將冷凍保存的甘藍腫根取出，室溫解凍，剪成小塊后稱重，加無菌水，用組織搗碎勻漿機攪成勻漿后，6層紗布過濾，調pH＝5～6，使孢子裂解充分、過濾雜質，利用血球計數板計測勻漿中休眠孢子濃度；

第三步，將第一步消毒后的種子，播在裝有滅菌基質的漂浮式育苗盤中，將接種液加入漂浮盤中；使混勻后的基質中休眠孢子濃度達10⁸個/g基質，保濕，進行正常管理；

第四步，抗性鑒定時間為感病品種嚴重感病時期，在播種6周后，根據的發病情況調查進行病情指數分級調查。

進一步，所述第一步中按照質量比為蛭石：草炭：滅菌土＝1：1：2，pH＝5～6。

進一步，所述第二步中加5倍重量的無菌水。

進一步，所述第三步中在25℃黑暗條件下保濕48h，進行正常管理。