[發明專利]一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞

在審

• 申請號: 201910081880.2
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN110055276A
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 羅艷;張振倉;薛增迪;高睿;白軍;沈文正
• 申請（專利權）人: 楊凌職業技術學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A61K35/36;A61P15/14
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

本發明公開了一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞，金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體包括IsdB單鏈抗體基因，HBD3基因，和BCE1?IL1α復合型啟動子；將細菌誘導型表達載體pIsBD轉染山羊乳腺上皮細胞，獲得重組細胞。本發明提供的一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞，用于抗乳腺炎。

技術領域

本發明涉及動物抗病育種技術領域，更具體的說是涉及一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞。

背景技術

乳腺炎是由病原菌引起的乳腺炎癥反應，該病造成巨大經濟損失，給世界奶業的發展帶來了巨大的障礙。導致乳腺炎發生的病原菌可達上百種，其中金黃色葡萄球菌是一種最為重要的乳腺炎病原菌。臨床上主要采用抗生素治療乳腺炎，造成了耐藥菌產生和藥物殘留等問題。金葡菌的多重耐藥性使傳統的抗生素治療方法無法獲得滿意的效果，其治愈率較低。疫苗本應成為一種理想的乳腺炎防治措施，但由于細菌的基因遺傳變異，而導致疫苗的保護效果不理想。人β-防御素3(humanβ-defensin 3，HBD3)具有廣譜抗菌作用，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都有活性，尤其對金黃色葡萄球菌具有強烈的殺傷性，并可殺滅多重耐藥的金黃色葡萄球菌，病原微生物對其不易產生耐藥性。但HBD3對骨架系統比較發達的哺乳動物細胞無傷害作用，安全性較高。

研究人員利用分子生物學和胚胎體外生產技術，制備了多種抗乳腺炎動物模型，結果表明，乳腺表達抗菌肽能夠顯著提高動物抗乳腺炎能力，該技術為防治乳腺炎提供了一條重要途徑。在上述研究中，乳蛋白啟動子用于驅動抗菌肽表達，在泌乳期外源抗菌肽隨著乳蛋白表達而表達，從而防止病原菌感染乳腺組織。但是這種策略存在一些問題：首先，除了泌乳期之外，干奶期和轉化期也是乳腺炎易感時期，而抗菌肽只在泌乳期表達，不能防止干奶期乳腺炎的發生；其次，HBD3在乳腺泌乳期持續表達，對乳品安全和乳腺生理功能可能存在不安全因素。因此，在抗乳腺炎動物進入生產應用之前，必須解決上述安全性問題。而且，研究發現防御素在體內的半衰期較短，體內注入防御素幾分鐘到數小時后，血液中的防御素就會被清除，在一定程度上抑制了防御素到達靶標區發揮其活性。

因此，提供一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞，用于抗乳腺炎，是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞，用于抗乳腺炎。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體，包括IsdB單鏈抗體基因，HBD3基因，和BCE1-IL1α復合型啟動子。

進一步，一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體的構建方法，具體步驟如下：

(1)制備IsdB單克隆抗體；

(2)制備抗IsdB單鏈抗體-HBD3融合蛋白；

(3)優化細菌誘導型啟動子，獲得BCE1-IL1α復合型啟動子；

(4)將IsdB-HBD3融合蛋白基因置換載體pSBD中HBD3基因，BCE1-IL1α復合型啟動子置換載體pSBD中IL1α啟動子，獲得IsdB-HBD3細菌誘導型表達載體pIsBD。

進一步，所述金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體在抗乳腺炎中的應用。

進一步，一種含有金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體的重組細胞，將細菌誘導型表達載體pIsBD轉染山羊乳腺上皮細胞，獲得重組細胞。

進一步，所述含有金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體的重組細胞，在抗乳腺炎中的應用。

經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本發明公開提供了一種金葡菌靶向抗菌肽細菌誘導型表達載體及其重組細胞，用于抗乳腺炎。