[發明專利]一種利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法

有效

• 申請號: 201910080673.5
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN109856268B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 李清雪;孫王茹;劉含雨;付超;王玉冰
• 申請（專利權）人: 河北工程大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 李興林

1.一種利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述抗生素包括磺胺類抗生素、β-內酰胺類抗生素、喹諾酮類抗生素，該方法包括以下步驟：

(1)首先選取待測水樣；

(2)將待測水樣進行過濾，然后加入Na₂-EDTA，并調節pH值至3；

(3)在活化后的HLB小柱中通入步驟(2)處理后的待測水樣，對待測水樣進行富集；

(4)利用洗脫劑對富集后的HLB小柱進行洗脫，得到洗脫液，將洗脫液進行濃縮，得到濃縮液；

(5)將濃縮液用甲醇定容至1mL，移取稀釋后的待測水樣，利用高效液相色譜進行檢測抗生素，所述高效液相色譜采用Shim-pack GIST C18的色譜柱，柱溫為40℃，進樣體積為30μL，其中高效液相色譜儀采用的流動相為以濃度為0.1％的甲酸水溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，以乙腈為流動相C，采用梯度洗脫方式，流動相的流速為0.8mL/min；

(6)計算出水樣中抗生素對應的峰面積，根據標準曲線定量計算，得出水樣中多種抗生素的含量；

所述磺胺類抗生素為甲氧芐啶、磺胺嘧啶，磺胺甲惡唑，β-內酰胺類抗生素為頭孢克洛，頭孢克肟，頭孢唑林，喹諾酮類抗生素為氟羅沙星，諾氟沙星，環丙沙星，洛美沙星；

所述步驟(5)流動相的梯度洗脫方式為：0-6min，流動相A與流動相B、流動相C的體積比為8:1:1；6-8min，流動相A與流動相B、流動相C的體積比為13:5:2；8-9min，流動相A與流動相B、流動相C的體積比為6:3:1；9-13min，流動相A與流動相B、流動相C的體積比為5:4:1；13-14min，流動相A與流動相B、流動相C的體積比為8:1:1。

2.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟(2)中采用孔徑為0.45μm濾膜過濾水樣，且Na₂-EDTA的加入量為0.5g/L。

3.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟(2)中采用4mol/L的鹽酸調節水樣的pH。

4.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟(3)HLB小柱的活化方法為依次用5mL甲醇，5mL質量濃度為0.1％甲酸水溶液通過HLB小柱進行活化處理。

5.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟(3)待測水樣通過HLB小柱的速度為5mL/min。

6.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，步驟(4)對富集后的HLB小柱進行洗脫具體為：首選使用6mL質量濃度為5％的甲醇水溶液對富集后的HLB小柱進行淋洗，真空干燥20min后再使用6mL甲醇進行淋洗。

7.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，步驟(4)中洗脫液的濃縮方法為自然吹風至近干。

8.根據權利要求1所述的利用高效液相色譜快速檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀的檢測波長為270nm。