[發明專利]一種S100B蛋白的化學發光法檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201910079965.7
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN111487409A
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 趙京超;艾冰花;焉麗波;王立杰;常青俠;陳蒙蒙
• 申請（專利權）人: 艾維可生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 深圳盛德大業知識產權代理事務所(普通合伙) 44333
• 代理人: 賈振勇

本發明適用于生物技術領域，具體涉及一種S100B蛋白的化學發光法檢測試劑盒及其使用方法，所述S100B蛋白的檢測試劑盒包括包被有抗S100B單克隆抗體的酶標板、辣根過氧化物酶標記的檢測用抗S100多克隆抗體溶液、標準品、標準品稀釋液、樣本稀釋液、濃縮洗滌液、發光液A和發光液B、檢測抗體稀釋液。本發明實施例提供的試劑盒待測品(標準品或血清樣本)與辣根過氧化物酶標記的檢測用抗S100多克隆抗體溶液的反應時間為2小時；臨床常見的病理性黃疸和脂血癥標本對血清S100B蛋白測定未見明顯干擾；批內及批間平均變異均小于5.0％，具有簡便、快速、特異、敏感，適于臨床常規應用的技術效果。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種S100B蛋白的化學發光法檢測試劑盒及其使用方法。

背景技術

S100B蛋白是一個分子量為21KD的酸性鈣結合蛋白。由于其分子量較小，并大量存在中樞神經系統中，在體內發揮著多種生物學功能，因此，它與血腦屏障和腦損傷有著密切的關系。目前，國內外已對S100B蛋白，特別是對其在血清中的動態變化水平在疾病的診斷、預后方面的臨床意義方面進行了大量研究。

S100B的檢測實際是對S100B亞單位的檢測，S100B蛋白檢測主要采用免疫學方法，目前主要有放免分析法(RIA)或免疫放射測定法(IRMA)、熒光免疫測定法(FIA)、酶聯免疫吸附法(ELISA)和電化學發光法(ECLIA)，用于檢測腦脊液、血液、尿、羊水等中S100B蛋白的含量，從而進行進一步的臨床診斷。

放射免疫(RIA)或免疫放射測定法(IRMA)測定的基本原理是標記抗原與未標記待測抗原競爭反應系統中有限抗體上的特異結合位點，其靈敏度為0.2μg/L。但因存在放射污染和危害，核素半衰期短，試劑盒穩定期短，操作繁瑣等不足而應用受限。

熒光免疫法(FIA)的基本原理是以熒光色素標記的特異性抗體，與待測抗原結合，測定熒光的強度以計算出標本中抗原的含量。Wiesmann等采用FIA方法，用抗S100B蛋白單抗包被微孔板.與待測抗原及生物素標記兔抗S100B抗體結合.形成雙抗體夾心復合物。此法靈敏度較IRMA顯著提高，達到0.015μg/L，重復性好，可自動化。但須專門的熒光設備，因此在臨床上不易普及。

酶聯免疫吸附試驗(ELISA)采用原核系統表達的S100B作為標準品并制備抗S100B單克隆抗體，建立的雙抗體夾心法，其靈敏度高達0.0125μg/L，線性范圍0-3.2μg/L，CV6.9％。ELISA法較RIA、FIA具有靈敏度高、無污染、操作簡便、報告結果快速等諸多優點，在臨床上具有極大的應用價值。我國已有國產化ELISA試劑，有較好的穩定性和靈敏度。

電化學發光法(ECLIA)是利用鏈霉親和素包被的磁珠和生物素化的抗體與S100B抗體連接為一體，形成雙抗體夾心，最后通過與抗體偶聯的發光劑和電子供體TPA通過氧化還原反應在電極表面周而復始地進行，產生許多光子，光電倍增管檢測光強度，光強度與發光劑的濃度呈線性關系，故可測出待測抗原的含量。電化學發光法的優點：⑴標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定；⑵敏感度高，可達pg/mL水平；⑶線性范圍寬；⑷反應時間短，20min以內可完成測定；⑸試劑穩定性好，2～5℃可保持一年以上，是目前較為常用的檢測方法。與ELISA法相比其主要優勢為其反應動力學較ELISA方法更快，并且具有更大的固相結合表面。分析方法的設計與ELISA方法有很多相似處，但在實驗設計上卻擁有更多的靈活性。

因此，為了滿足臨床檢測需求，更快、更準確的實現對血清中S100B蛋白的定量檢測，亟需一種定量測定血清中S100B濃度水平的體外診斷試劑盒，為顱腦損傷和腦血管疾病診斷及預后判斷提供幫助。

發明內容

本發明實施例提供一種S100B蛋白的化學發光法檢測試劑盒，以滿足臨床檢測需求，更快、更準確的實現對血清中S100B蛋白的定量檢測。