[發(fā)明專(zhuān)利]一種具有細(xì)胞粘附功能的可發(fā)光膠原多肽-鑭系金屬?gòu)?fù)合納米材料的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910079659.3
• 申請(qǐng)日: 2019-01-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110129252B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖建喜;孫秀霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/00;B82Y40/00
• 代理公司: 北京力量專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 韓慧穎

1.一種具有細(xì)胞粘附功能的可發(fā)光膠原多肽-鑭系金屬?gòu)?fù)合納米材料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)膠原多肽的設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)氨基酸序列的膠原多肽，所述膠原多肽的序列為DD(GPO)₃GDOGPOGFOGERGPO GDO(GPO)₃DD，或EE(GPO)₃GEOGPOGFOGERGPOGEO(GPO)₃EE；

(2)膠原多肽的合成

將步驟(1)設(shè)計(jì)好的膠原多肽采用Fmoc固相合成法，利用手動(dòng)合成儀逐步合成，合成步驟為：a、樹(shù)脂處理溶脹；b、活化氨基酸；c、縮合反應(yīng)；d、α-氨基脫保護(hù)；e、延伸肽樹(shù)脂；f、切割肽樹(shù)脂；g、肽的分離純化；

(3)膠原多肽-鑭系金屬?gòu)?fù)合納米材料的制備

配制濃度為1-100mg/mL的膠原多肽溶液、濃度為1-100mg/mL的不同鑭系金屬的硝酸鹽溶液，將其混合后，在25℃的恒溫箱里放置反應(yīng)1-48hrs，將得到的反應(yīng)產(chǎn)物在8000rpm下進(jìn)行固液分離，得到固體沉淀；

(4)復(fù)合納米材料的發(fā)光性質(zhì)

將上述步驟(3)得到的固體沉淀放入25℃的恒溫培養(yǎng)箱烘干24-96hrs，得到干燥的膠原多肽-鑭系金屬?gòu)?fù)合納米材料；利用熒光光譜儀檢測(cè)該固體樣品的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)；

(5)復(fù)合納米材料的細(xì)胞粘附功能

將上述步驟(3)得到的固體沉淀分散于無(wú)水乙醇中，得到固含量為1-10mg/mL的懸浮溶液，將懸浮溶液滴至96微孔板中，使其完全干燥，用PBS洗滌三次，加入100μL無(wú)血清DMEM或MEM培養(yǎng)基的細(xì)胞懸液，在37℃孵育3-6小時(shí)，用PBS或是生理鹽水輕輕洗滌96微孔板2-3次，將96微孔板中加入超純水冷凍-融化循環(huán)三次，進(jìn)行裂解細(xì)胞；然后加入工作濃度為5μg/mLHoechst33258染料避光培養(yǎng)1h，最后用酶標(biāo)儀測(cè)定熒光強(qiáng)度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有細(xì)胞粘附功能的可發(fā)光膠原多肽-鑭系金屬?gòu)?fù)合納米材料的制備方法，其特征在于：步驟(3)中所述鑭系金屬元素為鑭、鈰、鐠、釹、钷、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有細(xì)胞粘附功能的可發(fā)光膠原多肽-鑭系金屬?gòu)?fù)合納米材料的制備方法，其特征在于：步驟(5)中無(wú)血清DMEM或MEM培養(yǎng)基的細(xì)胞懸液的濃度為10×10⁵cells/mL；超純水冷凍的冷凍溫度為-85℃～-75℃，酶標(biāo)儀測(cè)定熒光強(qiáng)度過(guò)程的激發(fā)波長(zhǎng)355-365nm，發(fā)射波長(zhǎng)460-470nm。