[發明專利]新型愛德華氏菌減毒靶點及其應用

有效

• 申請號: 201910079586.8
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN111484960B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 王啟要;馬瑞青;張元興;劉琴
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12Q1/689;C12Q1/04;A61K39/02;A61P31/04;G01N33/569;C12R1/01
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發明涉及新型愛德華氏菌減毒靶點及其應用。首次在愛德華氏菌中鑒定獲得一種愛德華氏菌毒性相關的基因――ETAE_0023基因。本發明還揭示了以該基因為靶點開發的愛德華氏菌減毒株以及減毒疫苗，其免疫原性顯著，體內清除率高，具有非常理想的安全性及免疫應答效果。

技術領域

本發明屬于減毒活疫苗研發領域；更具體地，本發明涉及一種新的愛德華氏菌減毒靶點的鑒定及應用。

背景技術

隨著人民群眾生活水平的提高，人們對海產品的需求量越來越大，中國水產業的養捕比逐年提高。據統計，2016年中國水產養殖面積達到8346千公頃，養殖水產品總量為5142萬噸，水產養殖產量占漁業總產量的75％，約占世界養殖總產量的60％。規模化、集約化、高密度的養殖模式逐漸成為中國魚類養殖業的發展主流。然而，隨著漁業養殖的不斷穩步發展，產生的潛在問題就是水產養殖病害問題的日益嚴重。病害一旦出現，會造成大面積的水體污染，不僅對水產養殖動物有極高的致死率，也嚴重威脅著人們的身體健康。據統計，水產養殖業每年病害發生率高達50％，損失近20％。養殖產量及成長造成嚴重影響，已成為制約中國水產養殖業發展的重要因素之一。

針對各種病害的發生，以抗生素為代表的化學療法對病害的控制和防治曾發揮了積極作用。但是，這種病害控制措施造成的環境污染、抗藥病原的大量出現、水產品的藥物殘留等負面影響日趨嚴重。在歐盟、美國和加拿大，以抗生素為主的化學藥物在水產養殖業中已逐漸被禁用。其中，根據歐盟食品安全白皮書的規定，歐盟國家禁止使用抗生素藥物的養殖水產品進入貿易市場。日本也開始限制使用多種抗生素藥物用于養殖魚類和蝦類病害的防治。

在中國，人們對水產品安全越來越關注，對環境保護的呼聲日益高漲，采用各種化學藥物防治水產養殖動物病害的方式也越來越多地受到了質疑。因此疫苗在提高動物體特異性免疫水平的同時亦能增強機體抗應激的能力，且符合不污染環境、水產食品無藥物殘留的要求，已成為當今世界水生動物疾病防治界研究與開發的主流產品。為了滿足消費者對綠色水產品的需求，同時保護養殖環境達到可持續利用的目的，近年來，世界各國都在積極開展水產用疫苗的研制。

疫苗具有針對性強、抗病周期長、可終身免疫、效果顯著和防治主動的特點。以病原菌細胞滅活體為基礎形式的滅活疫苗(Kill?vaccine)為水產養殖病害防治提供了有效手段。如弧菌疫苗，Hitra病毒苗和紅嘴病菌苗等革蘭氏陰性菌的帶病原的菌苗，已可以通過液體發酵和福爾馬林滅活進行生產。這些疫苗可以通過注射或浸泡的方法使用。用于疫苗制備的血清型涵蓋了所有菌株，并且疫苗使用方法正確，這類疫苗是很有效的。近年來，滅活疫苗中如用于抗大麻哈魚傳染性胰腺壞死病的IPNV疫苗、抗鮭魚傳染性造血器官壞死癥的IHNV疫苗和抗草魚出血癥感染的GCRV疫苗等已得到成功應用。

水產養殖業的產業特點要求病害防治技術必須經濟、應用實施方便。因此，疫苗產品的開發除高效價的技術要求外，免疫成本必須低廉，不能超出養殖業的承受能力。減毒活疫苗因具有給藥方便(可浸泡給藥)、免疫效價高(可減少給藥劑量)、成本低廉、可開發廣譜疫苗(活菌疫苗往往具有交叉保護性)的新技術優勢，已成為當前國際上水產養殖用疫苗研究和開發的熱點和前沿領域。并且構建的減毒株具有表達異源抗原以開發多效價疫苗(特別是針對病毒病害)的潛在價值，也成為疫苗開發的國際前沿和熱點領域。

愛德華氏菌屬是導致淡水、海水養殖魚類細菌性疾病的一類常見的病原體，具體分為遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiella?tarda)，鯰魚愛德華氏菌(Edwardsiella?ictaluri)和保科愛德華氏菌(Edwardsiella?hoshinae)。由其引起的魚類出血性敗血癥統稱為愛德華氏菌病(Edwardsiellosis)。該病傳播面積廣，無明顯季節性，感染率及死亡率高，危害的種類多，有鯉魚，羅非魚，鰻鱺，鯔魚，鮭魚，鱒魚，鲆鰈等大多數具有較高經濟價值的魚種。此外，遲鈍愛德華氏菌還感染貝類、爬行類、兩棲類、鳥類、哺乳類。值得注意，遲鈍愛德華氏菌還是一種重要的人畜共患病原菌，它是愛德華氏菌屬中唯一感染人類的成員。目前，中國養殖魚類愛德華氏菌病病害比較嚴重的病原體主要為遲鈍愛德華氏菌，并有存在病原體向人體轉移的巨大威脅。