[發(fā)明專利]一種測(cè)定飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910079255.4
• 申請(qǐng)日: 2019-01-28
• 公開（公告）號(hào): CN109655454A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳義強(qiáng);趙偉;許丹丹;朱曉春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇澳華生物科技研究院有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 淮安市科文知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 32223
• 代理人: 張麗

本發(fā)明公開了一種測(cè)定飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子含量的方法，采取硫代硫酸鈉對(duì)銅離子進(jìn)行掩蔽，用鹽酸羥胺將飼料中的三價(jià)鐵離子還原為二價(jià)鐵離子，在pH=6和室溫條件下亞鐵離子與菲咯嗪絡(luò)合形成穩(wěn)定性好的紫色絡(luò)合物，反應(yīng)30分鐘，通過酶標(biāo)儀在562 nm處進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，快速、高通量計(jì)算出飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子的含量，無需復(fù)雜的樣品前處理和貴重儀器，非常適合于在基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及飼料質(zhì)量安全檢測(cè)領(lǐng)域，更具體地說，它涉及一種測(cè)定飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子含量的方法。

背景技術(shù)

鐵是地球上分布最廣、最常見的金屬之一，也是人類、動(dòng)物和植物生長(zhǎng)必須的微量元素，參與體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝過程。缺鐵易導(dǎo)致貧血等疾病，攝入過量的鐵又會(huì)提高腫瘤以及心血管和內(nèi)分泌疾病的風(fēng)險(xiǎn)。飼料中鐵的含量會(huì)對(duì)畜禽健康產(chǎn)生影響，過量的鐵通過畜禽廢棄物排出體外，會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生鐵毒害，對(duì)植物的生長(zhǎng)、葉綠素含量及抗氧化酶活性等產(chǎn)生影響。鐵還會(huì)影響植物對(duì)其他金屬離子的吸收。我國(guó)規(guī)定飼料中鐵的限量標(biāo)準(zhǔn)為250mg/kg，因此，測(cè)定飼料中鐵含量對(duì)保障人類、動(dòng)物和植物健康安全具有重要的意義。同時(shí)，鐵離子的價(jià)態(tài)對(duì)其在動(dòng)物體內(nèi)的吸收和利用影響較大。因此，有必要建立相應(yīng)的方法對(duì)飼料中鐵離子總量和價(jià)態(tài)進(jìn)行測(cè)定。

鐵的檢測(cè)目前主要采用原子吸收光譜分析法（AAS）、電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜法（ICP-AES）、電感耦合等離子體-質(zhì)譜分析法（ICP-MS）等儀器分析方法，其中原子吸收光譜法是我國(guó)現(xiàn)行的飼料中鐵離子的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。原子吸收光譜法具有準(zhǔn)確度和精密度高等特點(diǎn)，但需要昂貴的儀器以及配備專業(yè)的操作人員，不適用于基層試驗(yàn)室。同時(shí)原子吸收法樣品前處理對(duì)樣品進(jìn)行消解，需要消耗強(qiáng)酸，同時(shí)消解時(shí)間較長(zhǎng)，不適合于現(xiàn)場(chǎng)快速分析。

近年來，研究人員也開發(fā)了多種快速分析方法，如電化學(xué)檢測(cè)法、分光光度法。電化學(xué)檢測(cè)法具有較高的靈敏度，但是電極基底的制備和修飾過程較為復(fù)雜，且需要配備電化學(xué)工作站。分光光度法有著靈敏度高、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，但分光光度法測(cè)定水質(zhì)中鐵目前應(yīng)用較為廣泛，主要有硫氰酸鹽分光光度法、鄰菲羅啉分光光度法等，但這些檢測(cè)方法靈敏度低、、顯色反應(yīng)速度慢，不適于對(duì)飼料中鐵離子的測(cè)定。同時(shí)，常規(guī)的快速分析方法不能對(duì)不同價(jià)態(tài)的鐵離子進(jìn)行測(cè)定。因此，本發(fā)明旨在開發(fā)一種基于微孔顯色法，且靈敏度高、線性范圍寬、儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便的實(shí)驗(yàn)室方法，用于飼料中總鐵和不同價(jià)態(tài)鐵離子的快速、高通量檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供解決上述問題的一種測(cè)定飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子含量的方法，能夠快速、高通量對(duì)飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子含量進(jìn)行檢測(cè)，無需復(fù)雜的樣品前處理和貴重儀器，成本低，抗干擾能力強(qiáng)，非常適合在基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

一種測(cè)定飼料中不同價(jià)態(tài)鐵離子含量的方法，其測(cè)定步驟如下：

（1）配制溶液

A1液：菲咯嗪總鐵工作溶液，包括.4.0mM菲咯嗪溶液、0.1M鹽酸羥胺溶液和0.1 M硫代硫酸鈉溶液，緩沖液為ph=6的醋酸溶液；

A2液：菲咯嗪亞鐵工作溶液，包括4.0 mM菲咯嗪溶液和0.1 M硫代硫酸鈉溶液，緩沖液為ph=6的醋酸溶液；

B液：空白溶液，0.2M 醋酸緩沖溶液；

C液：鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1、0.5、1、2、4、6、8μg/mL，分別為C1-C8鐵標(biāo)準(zhǔn)液；

（2）樣品前處理

將飼料樣品經(jīng)粉碎后與1%三氯乙酸溶液混合，比例為1:100（g/ml），振蕩后通過定量濾紙過濾或離心得到上清液；

（3）檢測(cè)