[發明專利]一種高效同時檢測禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多殘留的分析方法

在審

• 申請號: 201910078312.7
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN109655551A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 謝愷舟;王波;趙霞;謝星;龐茂達;王雅娟;郭亞文;卜曉娜;劉楚君;刁志祥;張培楊;王旭堂;陳長寬;張跟喜;張濤;戴國俊;王冉;卜仕金;王金玉
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 薛海霞;董建林

本發明涉及獸藥殘留檢測領域，具體涉及一種高效同時檢測禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多殘留的分析方法，包括如下步驟：1）禽蛋、禽肉或豬肉樣品提取與凈化；2）超高效液相色譜?熒光檢測：a.超高效液相色譜條件：以流動相A：含0.005mol/L的NaH₂PO₄、0.003mol/L十二烷基硫酸鈉和0.05%的三乙胺的水溶液和流動相B：乙腈為流動相；b.熒光檢測。該方法能高效、準確同時檢測禽蛋（雞蛋、鴨蛋、鵝蛋、鴿蛋和鵪鶉蛋）、禽肉（雞肉、鴨肉和鵝肉）及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的殘留，且滿足中國農業部、美國（FDA）和歐盟（EU）獸藥殘留檢測方法的要求。

技術領域

本發明涉及獸藥殘留檢測領域，具體涉及一種高效同時檢測禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多殘留的分析方法。

背景技術

目前，國內外關于甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺殘留的檢測方法有微生物法、免疫學檢測方法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-串聯質譜法和液相色譜-串聯質譜法等，但超高效液相色譜-熒光檢測法(UPLC-FLD)同時檢測禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺殘留的方法還尚未見報道。因此，本發明首次建立禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺殘留同時檢測的UPLC-FLD檢測法。

發明內容

為了能高效、準確的同時檢測甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺在禽蛋(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋、鴿蛋和鵪鶉蛋)、禽肉(雞肉、鴨肉和鵝肉)及豬肉中的殘留，本發明提供了一種超高效液相色譜-熒光檢測(UPLC-FLD)方法。該方法能高效、準確的同時檢測禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的殘留，且滿足中國農業部、歐盟(EU)獸藥殘留檢測的要求。該方法洗脫程序簡單，溶劑消耗少，分析效率高，靈敏度和精密度好，適合在大批量樣品分析中應用與推廣。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：一種高效同時檢測禽蛋、禽肉及豬肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多殘留的分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)禽蛋、禽肉或豬肉樣品提取與凈化；

2)超高效液相色譜-熒光檢測：

a.超高效液相色譜條件：以ACQUITYBEH C₁₈為色譜柱；以流動相A：含0.005mol/L的NaH₂PO₄、0.003mol/L十二烷基硫酸鈉和0.05％的三乙胺的水溶液和流動相B：乙腈為流動相；流速：0.2mL/min；柱溫：30℃；所述的百分比為體積百分比；

b.熒光檢測：采用熒光檢測器，激發波長233±2nm，發射波長284±2nm。

步驟a中，流動相A的pH值為5.3±0.1。在步驟a中，分離禽蛋中目標物時流動相A:B＝64:36V/V，分離禽肉及豬肉中目標物時流動相A:B＝65:35V/V；所述的目標物指甲砜霉素、氟苯尼考或氟苯尼考胺。步驟a中，進樣體積優選10μL。

步驟(1)具體過程為：1)準確稱取均質好的禽蛋、禽肉或豬肉空白樣品放于研缽中，并加入適量硅藻土研磨，裝入萃取池中，用ASE進行萃取；2)在1500psi，80℃萃取條件下，禽蛋樣品用乙腈:氨水萃取，乙腈:氨水的體積比為98:2，禽肉和豬肉樣品用乙酸乙酯:氨水萃取，乙酸乙酯:氨水的體積比為98:2，靜態萃取2次，每次靜態萃取時間3min，氮氣吹掃60s，收集萃取液待用；3)將上述萃取液轉移至離心管，置于50℃離心濃縮儀中濃縮；萃取液濃縮后，加入純乙腈，漩渦振蕩混勻，加入正己烷漩渦混勻，去脂，靜置，棄去上層，重復去脂一次，然后再置于離心濃縮儀中濃縮至干，待用；4)將濃縮干后的樣品用35％的乙腈復溶，漩渦振蕩混勻，離心，過濾，濾液供超高效液相色譜-熒光檢測。