[發(fā)明專利]一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用光合細菌的制備及純化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910077990.1
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN109666611A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢曉明;朱浩擁;溫松來;秦巍侖;王巧利
• 申請（專利權(quán)）人: 南通龍洋水產(chǎn)有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;C02F103/20;C02F101/16
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐激波

本發(fā)明公開了一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用光合細菌的制備及純化方法，包括以下步驟：A、制備培養(yǎng)基；B、制備光合細菌；C、光合細菌分離；D、光合細菌的純化，本發(fā)明的制備方法操作簡單，制備的光合細菌純度高，能夠提高光合作用效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及光合細菌制備技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用光合細菌的制備及純化方法。

背景技術(shù)

光合細菌一類是能進行光合作用的細菌，是具有原始光能合成體系的原核生物的總稱。它廣泛存在于水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及潮濕的土壤中，能夠以光作為能源，在厭氧光照或好氧黑暗條件下利用自然界的有機物、硫化物、氨等作為供氫體兼碳源進行光合作用，它表現(xiàn)出固氮、固碳、降解亞硝酸鹽、脫氫、硫化物氧化等不同的生理功能，使其在自然界的碳、氮、硫循環(huán)中發(fā)揮著重要作用。

在水產(chǎn)養(yǎng)殖上，光合細菌在凈化水質(zhì)、預(yù)防疾病、提高養(yǎng)殖群體的免疫力、提高飼料利用率等諸多發(fā)面都發(fā)揮著越來越大的作用。然而，市面上光合細菌的售價大多在3-5元/升，生產(chǎn)成本僅為0.8-1元。因此，為了節(jié)省使用成本、提高公司養(yǎng)殖效益，工程中心計劃從市售光合細菌、龍洋公司魚蝦養(yǎng)殖池中篩選光合細菌，以期形成自有的光合細菌品牌。

本發(fā)明的目的在于提供一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用光合細菌的制備及純化方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用光合細菌的制備及純化方法，包括以下步驟：

A、制備培養(yǎng)基，步驟如下：

a、富集用培養(yǎng)基制備：紫色非硫細菌富集培養(yǎng)基：酵母膏/蛋白胨1-2g、氯化銨1g、氯化鎂/硫酸鎂0.2g、氯化鈉2g、磷酸氫二鈉0.5g、水948 ml，121℃滅菌20min；之后加入下列經(jīng)過濾滅菌的溶液：50ml 10%的碳酸氫鈉、乙醇或4%丙氨酸2ml，用0.1N的磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0；

b、分離用培養(yǎng)基制備：紫色非硫細菌分離培養(yǎng)基：酵母膏/蛋白胨3-4g、氯化銨1g、氯化鎂/硫酸鎂0.2g、氯化鈉2g、磷酸氫二鈉0.5g、水948 ml，121℃滅菌20min；之后加入下列經(jīng)過濾滅菌的溶液：40ml 10%的碳酸氫鈉、乙醇或4%丙氨酸2ml；另取九水硫代硫酸鈉1g，加水10ml，于121℃蒸汽滅菌15min后加入培養(yǎng)基；之后用0.1N的磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0；固體培養(yǎng)基需加瓊脂1.5%-2.0%，半固體培養(yǎng)基加瓊脂0.6-0.8%；

B、制備光合細菌；

C、光合細菌分離：當(dāng)瓶中液體呈現(xiàn)紅色時，取1ml液體進行梯度稀釋，涂布固體培養(yǎng)基平皿，石蠟封閉培養(yǎng)皿，30℃、2000lx光照條件下培養(yǎng)7天，挑去其中呈紅色的單菌落進行劃線分離；

D、光合細菌的純化：把以上分離到的不同形態(tài)的菌株，進行反復(fù)的純化，直到在顯微鏡下觀察菌體形態(tài)基本一致，純化工作才結(jié)束，菌株做鑒定備用。

優(yōu)選的，所述步驟B中光合細菌制備方法如下：

1）、取10g土壤或10ml污水放置于500ml三角瓶中，按照1:5的比例加入滅菌后的液體富集培養(yǎng)基500ml，攪拌均勻后，在液面上加一層滅菌的液體石蠟形成厭氧環(huán)境，同時外加橡皮塞，以阻斷外界空氣，或者將淤泥放入50ml帶塞磨口瓶中，加滿培養(yǎng)基，塞好塞子，隔絕空氣，進行厭氧培養(yǎng)；

2）、在25-35℃溫度下，用5000-10000lx的光照強度進行光照培養(yǎng)2-3周，生活在海水中的菌株生長較緩慢，需要培養(yǎng)1-3月，這時，光合細菌在玻璃壁上呈菌落狀，布滿全部，呈紅色、深紅色、橙色或綠色；

3）、然后，用吸管在細菌生長良好的泥土層吸取泥水樣和細菌，移植至約50ml的試劑瓶中，再加入上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)；