[發明專利]一種鹽生草根系細胞質膜蛋白提取的方法

在審

• 申請號: 201910077035.8
• 申請日: 2019-01-27
• 公開（公告）號: CN109556941A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 姚立蓉;王化俊;汪軍成;李葆春;孟亞雄;馬小樂;楊軻;王剛;馬增科;胡娜;侯靜靜
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N27/447
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種鹽生草根系細胞質膜蛋白提取的方法，一種鹽生草根系細胞質膜蛋白提取的方法，采用如下步驟：（1）鹽生草根系的采集；（2）根系勻漿液的獲得；（3）根系研磨液的離心分離；（4）上清液進一步離心分離；（5）沉淀進行懸浮；（6）兩相分離；（7）上相進行離心分離；（8）質膜蛋白的保存；（9）聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。該方法能夠有效地獲得理想的鹽生草根系質膜蛋白，具有操作簡單，樣品損失率低，純度高的優點。

技術領域

本發明涉及植物根系細胞質膜蛋白提取領域，具體地說是一種鹽生草根系細胞質膜蛋白提取的方法。

背景技術

細胞質膜存在于細胞表面，主要由膜脂和膜蛋白組成，維護細胞內微環境的相對穩定，參與細胞內與外界環境的物質交換，能量和信息的傳遞，在細胞的生長和分化中起重要作用，是生物膜功能的主要承擔者。鹽生植物鹽生草（Halogeton glomeratus）具有極強的耐鹽性，其根系對Na⁺呈限制性吸收的特性，但是目前鹽生草根系對Na⁺的限制性吸收機理仍不明確，分離鹽生草根系的質膜蛋白對于研究鹽生草根系的耐鹽機制，挖掘耐鹽基因具有重要意義。當前并沒有任何關于鹽生草根系質膜蛋白提取方法的報道及可實施的操作方法。因此，提供一種簡便、可操作的鹽生草根系質膜蛋白的提取方法是具有重要的現實意義。

現有技術存在的問題：現有技術在分離細胞質膜蛋白的過程中，對樣品造成的污染較多，損失較大，且分離過程復雜，質膜蛋白獲得率較低。鹽生草為須根系根系不發達，細胞質膜蛋白含量低，相比其他植物細胞質膜蛋白提取更困難。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明提供了一種鹽生草根系細胞質膜蛋白提取的方法，以鹽生草根系為材料，通過密度梯度離心、兩相分離技術及超高速離心獲得理想的鹽生草根系質膜蛋白。

為了達到上述目的，本發明采用了如下的技術方案：

一種鹽生草根系細胞質膜蛋白提取的方法，包括如下步驟：

（1）鹽生草根系的采集

將鹽生草種子置于花盆中進行培養，待幼苗長至1-2個月，采集其根系。

（2）根系勻漿液的獲得

將步驟（1）采集的根系置于研缽，并加入勻漿研磨液（根系：勻漿研磨液=1：1），至根系研磨為液體狀。

（3）根系研磨液的離心分離

將步驟（2）獲得的根系研磨液置于超高速離心機，在26000-30000 g，4℃條件下離心25-30 min，取上清液，棄沉淀。

（4）上清液進一步離心分離

將步驟（3）獲得的上清液置于超高速離心機，在84000-90000 g，4℃條件下離心25-30min，取沉淀，棄上清液。

（5）沉淀進行懸浮

將懸浮液加入步驟（4）獲得的沉淀中，至沉淀完全溶解。

（6）兩相分離

將步驟（5）獲得的懸浮液置于兩相分離液中（懸浮液：分離液=1：2），并置于超高速離心機，在2000-2500 g，4℃條件下離心10-15 min，取上相，棄下相，并重復該步驟2次。

（7）上相進行離心分離

將步驟（6）獲得的上相置于超高速離心機，在85000-90000 g，4℃條件下離心30-35min，取沉淀。

（8）質膜蛋白的保存

將步驟（7）獲得的沉淀液氮冷凍，并真空冷凍干燥，最后-80℃保存。

（9）聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測