[發明專利]一種構建甘蔗抗褐銹病基因定位遺傳分離群體的方法

有效

• 申請號: 201910076734.0
• 申請日: 2019-01-27
• 公開（公告）號: CN109769688B
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 黃應昆;李文鳳;王曉燕;單紅麗;張榮躍;李婕;倉曉燕;尹炯;羅志明
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院甘蔗研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;C12Q1/6895
• 代理公司: 53207 云南凌云律師事務所
• 代理人: 康珉

1.一種構建甘蔗抗褐銹病基因定位遺傳分離群體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)親本選擇:選取來源不同的高抗褐銹病不含Bru1基因的甘蔗品種和高感褐銹病甘蔗品種作為親本；所述的來源不同的高抗褐銹病不含Bru1基因的甘蔗品種為粵糖00-236、ROC24，高感褐銹病甘蔗品種為Mex105、粵糖03-393；

(2)配制雜交組合雜交：以高感褐銹病甘蔗品種作母本×高抗褐銹病不含Bru1基因的甘蔗品種作父本配制雜交組合，通過雜交得到F1代種子；所配制的雜交組合為：Mex105×粵糖00-236，粵糖03-393×ROC24，Mex105×ROC24；

(3)雜交組合親本間多態性引物篩選：篩選出雜交組合在感病和抗病親本間條帶清晰、多態性明顯、重復性好的SSR引物；

Mex105×粵糖00-236的SSR引物為mSSCIR38引物和mSSCIR48引物，粵糖03-393×ROC24的SSR引物為mSSCIR67引物和66-SCC05引物，Mex105×ROC24的SSR引物為mSSCIR27引物和mSSESTA17引物；

所述mSSCIR38引物由mSSCIR38上游引物和mSSCIR38下引物組成，所述mSSCIR38上游引物的堿基序列如SEQ ID NO：1所示，mSSCIR38下游引物的堿基序列如SEQ ID NO：2所示；所述mSSCIR48引物由mSSCIR48上游引物和mSSCIR48下游引物組成，所述mSSCIR48上游引物的堿基序列如SEQ ID NO：3所示，mSSCIR48下游引物組成的堿基序列如SEQ ID NO：4所示；

所述mSSCIR67引物由mSSCIR67上游引物和mSSCIR67下游引物組成，所述mSSCIR67上游引物的堿基序列如SEQ ID NO：5所示，所述mSSCIR67下游引物的堿基序列如SEQ ID NO：6所示；所述66-SCC05引物由66-SCC05上游引物和66-SCC05下游引物組成，所述66-SCC05上游引物的堿基序列如SEQ ID NO：7所示，所述66-SCC05下游引物的堿基序列如SEQ ID NO：8所示；

所述mSSCIR27引物由mSSCIR27上游引物和mSSCIR27下游引物組成，所述mSSCIR27上游引物的堿基序列如SEQ ID NO：9所示，所述mSSCIR27下游引物的堿基序列如SEQ ID NO：10所示；所述mSSESTA17引物由mSSESTA17上游引物和mSSESTA17下游引物組成，所述mSSESTA17上游引物的堿基序列如SEQ ID NO：11所示，所述mSSESTA17下游引物的堿基序列如SEQ ID NO：12所示；

(4)篩選真實性雜交F1代群體：每個雜交組合F1代種子播種至少1000粒，利用步驟(3)所選的SSR引物對雜交組合F1代種子苗進行雜交后代真實性鑒定，每個雜交組合篩選出真實性雜交F1代單株至少500苗；

(5)田間人工接種褐銹病病菌：田間種植真實性雜交F1代確保成活至少400苗，用褐銹病病菌孢子懸浮液于傍晚噴霧田間種植的真實性雜交F1代蔗葉接種；首次接種后，第二天按前述接種方式再接種1次；

(6)病情調查：接種4-5周后，調查記錄各真實性雜交F1代單株發病情況，逐份材料進行調查，目測每份材料葉片褐銹病侵染面積百分率；

(7)抗病性評價：根據雜交F1代單株發病情況按1-9級分級標準進行褐銹病抗性評價，其中,葉片無癥狀為1級高抗；葉片病斑占葉面積10％以下為2級抗病；葉片病斑占葉面積11％-25％為3級中抗；葉片病斑占葉面積26％-35％為4級中感；葉片病斑占葉面積36％-50％為5級感病1；葉片病斑占葉面積51％-60％為6級感病2；葉片病斑占葉面積61％-75％為7級感病3；葉片病斑占葉面積76％-90％為8級高感1；葉片病斑占葉面積91％-100％為9級高感2；

(8)抗性遺傳分析：根據雜交組合中真實性雜交F1代群體中褐銹病抗性及其單株數量，按如下公式計算雜交組合的真實性雜交F1代群體的雜交后代遺傳分離群體抗感分離比：

雜交后代遺傳分離群體抗感分離比＝(1-3級抗病總單株數):(4-9級感病總單株數)，

選取雜交后代遺傳分離群體抗感分離比≈3:1的真實性雜交F1代群體為甘蔗抗褐銹病基因定位遺傳分離群體。

2.根據權利要求1所述的構建甘蔗抗褐銹病基因定位遺傳分離群體的方法，其特征在于：步驟(5)中所述的褐銹病病菌孢子懸浮液為采集帶褐銹病孢子蔗葉提取病菌孢子直接用于接種，具體是：采集帶褐銹病孢子甘蔗病葉浸泡于盛有清水的塑料盆中1h，用手搓揉病葉將孢子釋放至清水中，經24目分樣篩過濾后配成40-50個孢子/10×10倍視野的褐銹病病菌孢子懸浮液。