[發明專利]高通量檢測AhFAD2B基因突變位點的KASP標記分型引物組及其應用

在審

• 申請號: 201910073297.7
• 申請日: 2019-01-25
• 公開（公告）號: CN109593876A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 陳四龍;劉義杰;李玉榮;程增書;王瑾;宋亞輝;張朋娟
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院糧油作物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊元匯專利代理事務所(特殊普通合伙) 13115
• 代理人: 李彤曉

高通量檢測AhFAD2B基因突變位點的KASP標記分型引物組及其應用，本發明屬于分子遺傳育種技術領域，涉及一種利用高通量SNP分子標記檢測高油酸花生AhFAD2B基因分型的專用引物組合及其應用。所述引物組為檢測高油酸花生C814T中AhFAD2B基因814位C>T突變位點的KASP標記分型引物組，包括：帶有標簽A的野生型AhFAD2B基因特異引物，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；帶有標簽B的突變型AhFAD2B基因特異引物，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；AhFAD2B基因通用引物，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。本發明針對高油酸花生AhFAD2B新型突變814C>T等位變異設計了高通量KASP分子標記基因分型的特異引物，可以有效鑒別該AhFAD2B新型突變體，解決了現有技術的鑒別方法只能鑒別AhFAD2B經典F435突變位點448G>A等位變異的問題。

技術領域

本發明屬于分子遺傳育種技術領域，涉及一種利用高通量SNP分子標記檢測高油酸花生AhFAD2B基因分型的專用引物組合及其應用。

背景技術

花生是重要的食用植物油和蛋白質來源，油酸含量是影響花生油及花生加工制品理化穩定性和營養價值的重要品質指標。油酸屬于單不飽和脂肪酸，油酸分子中僅含有一個雙價不飽和鍵，與含有兩個或者多個雙價不飽和鍵的多不飽和脂肪酸(如亞油酸等)相比，油酸的化學穩定性更強，高油酸花生制品不易氧化酸敗，貨架期長，高油酸花生油比普通油酸含量花生油的貯藏期能延長14倍以上，高油酸花生烘焙產品的儲存期是普通油酸含量花生烘焙產品儲存期的8倍以上。與亞油酸相比，油酸可以在降低人體中低密度脂蛋白膽固醇含量的同時，維持高密度脂蛋白膽固醇的含量，從而保證人體對有益膽固醇的需求又不至于提高有害膽固醇的濃度，因此油酸對人體營養健康也十分有利。目前及今后一段時期內，發掘、創新高油酸花生種質資源和培育高油酸花生新品種將是花生品質遺傳改良、實現花生主推品種高油酸化的重要基礎性研究工作。

已有的植物脂肪酸合成代謝分子生物學研究表明，Δ¹²脂肪酸脫氫酶基因(FAD2)是負責將油酸(C18:1)第12碳位上的氫鍵催化去飽和轉化為含有2個不飽和鍵的亞油酸(C18:2)的關鍵基因。因為油酸通常以油酸-CoA、油酸-PLA、油酸-PC、油酸-DAG和油酸-TAG等形式參與油酸代謝，是多種脂肪酸的前體，所以FAD2基因的表達水平對合成脂肪酸的類型及數量起著重要作用。花生中位于基因組A09、B09染色體上的兩對同源非等位基因AhFAD2A和AhFAD2B的表達及酶活性對種子油酸含量具有重要影響。前人研究指出，AhFAD2A和AhFAD2B兩個基因對花生的油酸含量和亞油酸含量均有貢獻，只有兩個基因轉錄受抑制或編碼酶活性降低，花生才表現出高油酸性狀。

當前，國內外育成的高油酸花生品種和創制的高油酸花生種質大多是以二十世紀80年代美國科學家鑒定篩選的油酸含量80％(亞油酸2％)的自然突變體F435為高油酸基因供體親本進行雜交培育而來的。對F435及其衍生系的高油酸性狀遺傳分析和AhFAD2A、AhFAD2B基因分型發現，高油酸花生油酸表型受兩對隱性基因控制，高油酸花生中AhFAD2A基因編碼區448bp位點發現1個核苷酸突變448G>A，編碼的氨基酸由天冬氨酸(D)變為天冬酰胺(N)，使得AhFAD2A編碼酶活性大大降低；同時在AhFAD2B基因編碼區442bp位點處有1個堿基A插入(442insA)，造成移碼突變，導致編碼的蛋白序列提前終止。因此，一般普遍認為花生高油酸性狀的形成是AhFAD2A和AhFAD2B基因同時發生突變的結果。