[發明專利]一株高產血紅素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌及其構建方法有效
| 申請號： | 201910072760.6 | 申請日： | 2019-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN109609427B | 公開（公告）日： | 2021-11-12 |
| 發明（設計）人： | 邱東茹;戴景程;周集中 | 申請（專利權）人： | 中國科學院水生生物研究所 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;C12P17/18;C12R1/01 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001 | 代理人： | 江麗麗;王敏鋒 |
| 地址： | 430072 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高產 血紅素 洛伊 希瓦氏菌 基因工程 及其 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一株高產血紅素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌，其特征在于，所述工程菌是將洛伊希瓦氏菌(
2.權利要求1所述洛伊希瓦氏菌基因工程菌在生產血紅素中的應用。
3.權利要求1所述的高產血紅素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌的構建方法，包括以下步驟：
(1)敲除洛伊希瓦氏菌染色體上編碼具有限制性內切酶PstI和甲基化酶PstM活性的兩個基因，序列如SEQ ID NO.6和7所示，獲得的菌株易于進行遺傳操作；
(2)將基因ypjD的上、下游片段通過cross-over PCR連接后，與自殺質粒相連，構建自殺型敲除質粒p△ypjD；
(3)將含有自殺型敲除質粒的大腸桿菌營養缺陷菌株與步驟(1)獲得的洛伊希瓦氏菌接合，進一步篩選出發生雙交換的菌株，并經PCR擴增和測序證實框內缺失基因ypjD，從而獲得基因ypjD敲除的洛伊希瓦氏菌工程菌。
4.根據權利要求3所述的洛伊希瓦氏菌基因工程菌的構建方法，其特征在于，所述的自殺質粒為pDS3.0，感受態細胞為大腸桿菌營養缺陷菌株
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