[發(fā)明專利]一株偏二甲肼降解菌株WP52及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910070710.4
• 申請(qǐng)日: 2019-01-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109609414B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李艷菊;吳月;曾慶軒;王建營(yíng);王力;楊正禮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;B09C1/10;C02F3/34;A62D3/02;C12R1/38;C02F101/38;A62D101/06;A62D101/26
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本發(fā)明涉及一株能夠降解偏二甲肼的適冷假單胞菌(Pseudomonas extremaustralis)WP52，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。該菌株已于2018年6月11日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為：CGMCC No.15921。本發(fā)明的菌株WP52適生條件范圍寬，易培養(yǎng)，對(duì)低、中、高濃度偏二甲肼均具有降解作用，效率高，成本低，可應(yīng)用于偏二甲肼污染水體和土壤的生物修復(fù)，達(dá)到徹底降解偏二甲肼的目的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株偏二甲肼降解菌株及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

偏二甲肼(UDMH)，分子式為C₂H₈N₂，它是一種高能燃料，廣泛應(yīng)用于導(dǎo)彈、衛(wèi)星和飛船等航天器的發(fā)射中。偏二甲肼在生產(chǎn)、運(yùn)輸或儲(chǔ)存過(guò)程中的不慎排放，以及發(fā)射過(guò)程中產(chǎn)生的大量廢水，都會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。我國(guó)對(duì)偏二甲肼在環(huán)境中的允許濃度有嚴(yán)格限制。

環(huán)境中偏二甲肼的處理方法主要有物理、化學(xué)和生物方法。物理和化學(xué)方法存在處理不徹底、成本高或存在二次污染等問(wèn)題。生物方法具有高效、低耗，綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，是一種應(yīng)用前途廣泛的處理方法。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)偏二甲肼生物降解方面的研究報(bào)道較少，涉及到能夠降解偏二甲肼的微生物菌株則更少，且主要圍繞中低濃度(≤50mg/L)偏二甲肼的生物降解。本發(fā)明將提供一種能夠?qū)Φ汀⒅小⒏邼舛绕纂戮薪到庾饔玫奈⑸锞闣P52及其應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一株能夠降解偏二甲肼的菌株WP52及其應(yīng)用。

本發(fā)明所提供的偏二甲肼降解菌株WP52，篩選方法是：采集發(fā)射場(chǎng)附近土樣，添加到偏二甲肼濃度40-300mg/L的無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，在溫度為28-37℃，轉(zhuǎn)速為150-200r/min條件下培養(yǎng)2-7d后，用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基和馬鈴薯固體培養(yǎng)基劃線分離，在溫度為28-37℃下培養(yǎng)2-7d。然后，將分離得到菌株在上述固體培養(yǎng)基上劃線純化，得到純化菌株。同時(shí)，采用稀釋涂布法，直接用土樣制成懸濁液涂板，按照上述方法分離并純化菌株。

將純化得到菌株，分別接種于偏二甲肼為唯一氮源、濃度為50-300mg/L的無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，在溫度為28-37℃，轉(zhuǎn)速為150-200r/min條件下培養(yǎng)，定期取樣，測(cè)定偏二甲肼含量，并計(jì)算降解率。選取降解率高的菌株，由此篩選得到偏二甲肼降解菌株WP52。

無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基：K₂HPO₄ 1.000-3.000g/L，KH₂PO₄ 1.000-3.000g/L，NaCl 5.000-8.000g/L，MgSO₄ 0.200-0.800g/L，CaCl₂ 0.010-0.050g/L，F(xiàn)eSO₄ 0.005-0.010g/L，H₃BO₃0.100-0.200mg/L，ZnSO₄ 0.100-0.200mg/L，偏二甲肼40-300mg/L，葡萄糖0.0-5.000g/L。固體培養(yǎng)基添加瓊脂10.0-15.0g/L。

本發(fā)明所提供的菌株WP52，經(jīng)過(guò)16S rDNA提取，PCR擴(kuò)增，測(cè)序，序列比對(duì)，進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建，并結(jié)合形態(tài)特征觀察，確定該菌株為Pseudomonas extremaustralis(適冷假單胞菌)，并命名為適冷假單胞菌WP52(Pseudomonas extremaustralis WP52)。該菌株已于2018年6月11日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)，保藏號(hào)為：CGMCC No.15921，保藏單位地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。