[發明專利]幽門螺桿菌檢測體系及檢測試劑盒和應用

在審

• 申請號: 201910069881.5
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN109797203A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 王軍一;肖雯;尚慧捷;閆楠;閆蕾;趙達聰
• 申請（專利權）人: 杭州和壹基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

本發明屬于生物技術領域，涉及一種復合擴增體系及檢測試劑盒和應用，更具體的說，它涉及幽門螺桿菌的鑒定、分型及抗生素耐藥性檢測體系及試劑盒，即幽門螺桿菌檢測體系及試劑盒和應用。本發明提供一種幽門螺桿菌檢測體系，包括4種分別用于幽門螺桿菌的鑒定、分型及抗生素耐藥性的擴增體系的一種或多種的組合，可以無創、快速、便捷、準確、全面的用于幽門螺桿菌鑒定、分型及抗生素耐藥性檢測體系。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種復合擴增體系及檢測試劑盒和應用，更具體的說，它涉及幽門螺桿菌的鑒定、分型及抗生素耐藥性檢測體系及試劑盒，即幽門螺桿菌檢測體系及試劑盒和應用。

背景技術

幽門螺桿菌是一種以人體為主要宿主的呈螺旋形彎曲的革蘭氏陰性桿菌，因其可通過手、不潔食物、糞便等途徑傳染，在人群中感染率很高，全球幽門螺桿菌的感染率超過50％。我國幽門螺桿菌的感染率約為56％。幽門螺桿菌是一種具有高感染性的致病菌。幽門螺桿菌與慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤、胃癌發生密切相關。早在1994年，WHO下屬國際癌癥研究機構已將幽門螺桿菌感染定為胃癌的I類致癌因子。全國幽門螺桿菌感染處理共識報告顯示：幽門螺桿菌感染是預防胃癌最重要的可控危險因素，根除幽門螺桿菌感染可有效降低胃癌的發生率。

流行病學資料顯示，幽門螺桿菌感染者幾乎都存在慢性活動性胃炎，其中15％～20％發生消化性潰瘍，5％～10％發生幽門螺桿菌相關消化不良，約1％發生胃惡性腫瘤(胃癌、MALT淋巴瘤)，幽門螺桿菌感染導致不同嚴重程度的疾病，可能與幽門螺桿菌菌株毒力不同以及人群易感性差異有關。CagA蛋白是一種來源于幽門螺桿菌的致癌性蛋白。CagA蛋白依賴IV分泌系統(T4SS)轉位至上皮細胞內，并被Src和Abl蛋白激酶磷酸化。磷酸化的CagA蛋白再與SH2磷酸酶相互作用，最終導致胃黏膜上皮細胞發生改變，該改變可能與胃黏膜組織的癌變密切相關。幽門螺桿菌中存在兩種CagA等位基因類型，即東亞型與西方型。一項meta分析顯示，相較于西方型菌株，CagA東亞型(EPIYA-D)菌株會顯著增加胃癌發病風險(OR＝1.91,95％CI＝1.19-3.07,P＝.008)。CagA東亞型的高致癌性可能與其和SH2結構域的高親和力有關。

由于抗生素的耐藥性，導致幽門螺桿菌的根除率逐年降低。幽門螺桿菌耐藥率上升是根除率下降最主要的原因。目前我國推薦用于根除治療的6種抗菌藥物中，克拉霉素(耐藥率20％～50％)、甲硝唑(40％～70％)和左氧氟沙星(20％～50％)均已有相當高的耐藥率。常規藥敏試驗是通過細菌培養法來進行，因其需要在胃鏡下對胃黏膜進行活檢，并且培養周期較長，培養技術要求較高，可及性較低，難以大規模開展。現已證實這些抗生素的耐藥機制與幽門螺桿菌的基因突變有關。快速檢測幽門螺桿菌的耐藥相關基因突變有助于幽門螺桿菌根除治療方案的選擇。幽門螺桿菌對克拉霉素耐藥受多種因素影響，研究表明，幽門螺桿菌的23S rRNA突變A2142G和A2143G是目前已明確的幽門螺桿菌耐克拉霉素的原因。有研究表明，絕大部分的幽門螺桿菌對左氧氟沙星耐藥，是由于幽門螺桿菌上的gyrA基因Asn87或Asp91位點上的點突變所導致。

幽門螺桿菌的篩查方法有多種，不同方法的靈敏度和實用性均存在一定不足。比如常見的幽門螺桿菌呼氣檢測操作簡單方便，但不能進行幽門螺桿菌分型和耐藥性檢測，而血清蛋白試驗、活組織檢查、胃黏膜常規染色、藥物敏感性試驗等醫學檢驗手段操作繁瑣、技術難度高，而且有創、具有一定的侵入性，取樣環節需要進行嚴格的質量控制，難以快速普及。

鑒于上述情況，需要一種無創、快速、便捷、準確、全面的用于幽門螺桿菌鑒定、分型及抗生素耐藥性檢測體系及方法。本項目可通過糞便、血液、胃部灌洗液等多種樣本進行檢測，具有無創、非侵入、可居家取樣等特點；采用實時熒光定量PCR技術(QuantitativeReal-time PCR,本文中簡稱qPCR)，可一次性同時進行感染、基因分型和耐藥基因的快速準確檢測。

發明內容