[發(fā)明專利]一種用于檢測谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶熒光分子探針的制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910066810.X
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN109776390B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂長俊;陳令新;赫娜;于法標(biāo);黃嚴(yán)
• 申請（專利權(quán)）人: 濱州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C07D209/60
• 分類號: C07D209/60;C09K11/06;A61K49/00;G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 孔娟

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，所述用于檢測谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶熒光分子探針采用以下步驟制備：將2,3,3?三甲基?3H?苯并吲哚和碘乙烷溶解在無水乙腈中反應(yīng)得產(chǎn)物1；將無水N，N?二甲基甲酰胺和無水二氯甲烷混合，滴加三氯氧磷與無水二氯甲烷，加環(huán)己酮，倒入冰中收集得產(chǎn)物2；產(chǎn)物1和產(chǎn)物2溶解在正丁醇和苯溶液中得產(chǎn)物3；將產(chǎn)物3，甲胺鹽酸鹽和三乙胺溶解在無水N，N?二甲基甲酰胺中，得產(chǎn)物4；將3,4?二硝基苯甲酸、三光氣溶于無水二氯甲烷中混合，加N，N?二異丙基乙胺反應(yīng)，將得到的殘余物溶于無水二氯甲烷中，加入N，N?二異丙基乙胺和4?二甲氨基吡啶，將產(chǎn)物4溶解在二氯甲烷中并加入上述混合物，得所述分子探針。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種用于檢測谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶熒光分子探針的制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶是一組 普 遍 存 在 于 各 種 生 物 體 內(nèi) 的II 相代謝酶，是多種生物體內(nèi)的主要解毒系統(tǒng)，與許多生理及異源物質(zhì)的排泄有關(guān)，其普遍底物是2，4-二硝基氯苯（CDNB）。谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶可以催化谷胱甘肽的巰基（-SH）與一些難溶于水的物質(zhì)，如染料、膽酸、血紅素、激素及其他一些疏水性強(qiáng)的外來物質(zhì)等或內(nèi)源的代謝產(chǎn)物結(jié)合，使之極性增強(qiáng)，易溶于水，最終被降解，排出體外。另外，谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶在防止脂質(zhì)過氧化損傷擴(kuò)大、減少及修復(fù) DNA 損傷及癌細(xì)胞耐藥性的形成等方面也起著重要作用。目前已經(jīng)研究出幾種GSTs檢測方法，如2,4-二硝基氯苯(CDNB)衍生物的分析、紫外光譜和生物發(fā)光分析。這些檢測方法可以用于檢測和跟蹤細(xì)胞裂解物或體外谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶，然而，他們不能提供活細(xì)胞和活體體內(nèi)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶的原位和實(shí)時信息。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明目的是提供了一種用于檢測谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶熒光分子探針的制備方法，制備得到的分子探針可應(yīng)用與生物樣本檢測，具有超靈敏檢測、響應(yīng)倍率大、準(zhǔn)確度高和能對活細(xì)胞和活體體內(nèi)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行原位和實(shí)時成像等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了上述用于檢測谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶熒光分子探針的應(yīng)用，特別適合大批量樣本組合篩選等大數(shù)據(jù)研究。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶熒光分子探針的制備方法，采用以下步驟：

（1）將2,3,3-三甲基-3H-苯并吲哚和碘乙烷溶解在無水乙腈中，回流反應(yīng)，冷卻過濾，洗滌過濾沉淀物并真空干燥，得到產(chǎn)物1；

（2）將無水N，N-二甲基甲酰胺和無水二氯甲烷混合，冷卻，攪拌，將三氯氧磷與無水二氯甲烷一起勻速滴加到上述溶液中，將環(huán)己酮加入混合物中，直至溶液從無色變?yōu)辄S色，然后升溫至45℃保持3小時，然后反應(yīng)物倒入冰中，靜置，過濾并收集過濾物。

（3）將產(chǎn)物1和產(chǎn)物2溶解在正丁醇和苯的混合溶液中，回流3小時，然后真空干燥，得到的粗產(chǎn)物通過硅膠柱純化，得到產(chǎn)物3；

（4）將產(chǎn)物3，甲胺鹽酸鹽和三乙胺溶解在無水N，N-二甲基甲酰胺中，將混合物在加熱攪拌，將反應(yīng)粗產(chǎn)物用200-300目硅膠柱純化，得到產(chǎn)物4；

（5）將3,4-二硝基苯甲酸、三光氣溶于無水二氯甲烷中，在0℃混合，然后加入N，N-二異丙基乙胺，反應(yīng)，除去溶劑后，將得到的殘余物溶于無水二氯甲烷中，并加入N，N-二異丙基乙胺和4-二甲氨基吡啶，將產(chǎn)物4溶解在二氯甲烷溶液中并加入上述混合物，在25℃下攪拌直至原料耗盡，得到的固體粗產(chǎn)物通過200-300目的硅膠柱純化，即得谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶檢測熒光分子探針。

優(yōu)選地，上述方法采用的具體步驟為：

（1）將2,3,3-三甲基-3H-苯并吲哚和碘乙烷75mmol溶解在40 mL無水乙腈中，將混合物回流反應(yīng)12小時，冷卻至室溫后過濾，用乙醚洗滌過濾沉淀物并真空干燥，得到產(chǎn)物1；