[發(fā)明專利]一種改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910062881.2
• 申請日: 2019-01-23
• 公開（公告）號: CN109679975B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設計）人: 薛慶節(jié);閆迎春;裴杰;黃爍
• 申請（專利權）人: 濟寧醫(yī)學院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/74;C12N1/21;A61K39/245;A61P31/22;A61P35/00;C12R1/32
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 張娟

本發(fā)明公開一種改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其應用，融合基因是將去除致癌基因、加入增強子的LMP1與去除庸余序列、加入增強子的BZLF1基因進行融合得到；將改造BZLF1和改造LMP1的融合基因序列引入pMVS穿梭質粒上，然后與BCG感受態(tài)細胞電轉復蘇后獲得包含改造BZLF1和改造LMP1的融合基因的BCG疫苗；本發(fā)明構建的融合基因能夠同時發(fā)揮LMP1和BZLF1基因誘導潛伏期EBV進入裂解期復制的作用，從而協同殺傷EBV陽性腫瘤細胞；本發(fā)明得到的轉化BCG疫苗在預防結核病的同時，具有殺傷鼻咽癌細胞，很好的預防治療腫瘤的作用。

技術領域

本發(fā)明涉及微生物技術領域，具體說是一種改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其應用。

背景技術

研究表明，EB病毒（Epstein-barr virus，EBV）的感染與鼻咽癌、胃癌的發(fā)生關系密切，即刻早期基因（BZLF1）的表達可誘導病毒從潛伏期進入裂解期，所編碼的蛋白是一種轉錄激活因子，EB病毒感染宿主細胞包括潛伏期和裂解期，在EB病毒陽性腫瘤細胞中，病毒一般處于潛伏期，其潛伏存在及其DNA與宿主細胞整合是導致腫瘤細胞發(fā)生的重要原因，人工誘導病毒由潛伏期進入裂解期，導致腫瘤細胞裂解死亡，有望成為治療EB病毒相關腫瘤的新手段和新方法。將BZLF1重組后，感染EBV陽性腫瘤細胞，可以誘導腫瘤細胞中處于潛伏期的EB病毒進入裂解期，并開啟病毒復制基質，導致EB病毒陽性腫瘤細胞裂解死亡，達到特異性殺傷腫瘤細胞的作用，但是現有的即刻早期基因（BZLF1）轉錄頻率低，庸余序列多，影響了BZLF1的表達。

潛伏膜蛋白1（Latent membrane protein l，LMP1）是EB病毒編碼的一種癌蛋白，能夠組成激活各種信號通路，從而導致細胞生長不受控制，向癌細胞轉化和對腫瘤的微環(huán)境造成影響，而羧基端功能區(qū)是LMP1癌基因的功能區(qū)，刪除這個區(qū)域，LMP1將失去對B細胞轉化的能力，對LMP1基因進行改造，去除其在致癌過程中起決定作用的C末端部分氨基酸，使其不再具有致癌性，但是仍然具有良好的免疫原性。

卡介苗（BCG）是由減毒牛型結核桿菌懸浮液制成的活菌苗，具有增強巨噬細胞活性，加強巨噬細胞殺滅腫瘤細胞的能力，活化T淋巴細胞，增強機體細胞免疫的功能，但是目前還未有研究將預防其他癌癥的基因與其融合的報道，使卡介苗的功能單一。

如何將去除致癌部分基因、加入增強子的LMP1與去除庸余序列、加入增強子的BZLF1基因融合，并且增強機體的細胞免疫反應，同時發(fā)揮LMP1與BZLF1基因誘導潛伏期EBV進入裂解期復制的作用，從而協同殺傷EBV陽性腫瘤細胞是目前亟待解決的問題；此外，將該基因序列在現有疫苗中復制并表達，制備既能夠預防、治療鼻咽癌又具有較高安全性的轉化BCG疫苗，達到一次接種預防兩種疾病的目的也是我們亟待解決的問題。

發(fā)明內容

為解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其應用。

本發(fā)明為實現上述目的，通過以下技術方案實現：

一種改造BZLF1和改造LMP1的融合基因，是將去除致癌基因、加入增強子的LMP1與去除庸余序列、加入增強子的BZLF1基因進行融合得到；

改造BZLF1和改造LMP1的融合基因的基因序列為：