[發(fā)明專利]基于LC-MS技術(shù)同時(shí)測定中藥制劑中多種成分含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910062453.X
• 申請(qǐng)日: 2019-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN109856267B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李振國;陳艷明;鄭順亮;王思瑤;李萍;楊華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 牡丹江友搏藥業(yè)有限責(zé)任公司;九芝堂股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種中藥制劑的多種成分含量同時(shí)測定的方法，具體采用液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用(LC?MS)技術(shù)，結(jié)合多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，建立了天龍通絡(luò)膠囊中多種成分含量的同時(shí)測定方法。該方法能快速、有效地對(duì)天龍通絡(luò)膠囊中31種成分的含量進(jìn)行同時(shí)測定，方法準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，有利于提高天龍通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制水平，保障產(chǎn)品質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)同時(shí)測定中藥制劑中多種成分含量的測定方法。具體來說，就是采用一種液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，建立了天龍通絡(luò)膠囊中多種成分含量的同時(shí)測定方法，以提升其質(zhì)量控制水平。

背景技術(shù)

天龍通絡(luò)膠囊由地龍、天麻、丹參、川芎、人工牛黃等五味中藥按照“君臣佐使”的中醫(yī)藥經(jīng)典配伍理論組方而成，具有祛風(fēng)通絡(luò)、活血化瘀、豁痰開竅的功效，臨床上用于治療缺血性腦中風(fēng)及癱瘓、半身不遂、舌強(qiáng)語塞、手腳麻木等中風(fēng)后遺癥。授權(quán)公告號(hào)CN102125662 B，其發(fā)明名稱“一種用于治療中風(fēng)的復(fù)方中藥、其制備方法及其用途”的發(fā)明專利公開了該中藥制劑制備方法及用途。

天龍通絡(luò)膠囊的物質(zhì)基礎(chǔ)研究相對(duì)較少，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的含量測定項(xiàng)下也只對(duì)“臣藥”天麻中的成分天麻素進(jìn)行測定，成分的質(zhì)量控制方法相對(duì)單一而缺乏更好的代表性和全面性。因此，深入天龍通絡(luò)膠囊的物質(zhì)基礎(chǔ)研究及開發(fā)一種同時(shí)測定其中多種主要成分的含量測定方法作為其質(zhì)量控制手段勢在必行。本發(fā)明研究建立和驗(yàn)證了一種基于液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)同時(shí)測定中藥制劑中多種成分含量的測定方法，該方法準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，有利于提高天龍通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制水平，保障產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)同時(shí)測定中藥制劑中多種成分含量的測定方法，建立天龍通絡(luò)膠囊中31種主要成分的LC-MS(MRM)分離和同時(shí)含量測定方法，以提升天龍通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制水平。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案和步驟實(shí)現(xiàn)：

(1)對(duì)天龍通絡(luò)膠囊進(jìn)行提取。其中，對(duì)天龍通絡(luò)膠囊提取可以采用中藥制劑樣品溶液的常規(guī)提取方式：包括但不限于加熱提取、超聲提取、索氏提取等，進(jìn)一步的，優(yōu)選超聲提取；提取溶劑類型包括但不限于甲醇、乙醇、水、不同比例的甲醇-水和不同比例的乙醇-水等；料液比、提取溫度、提取時(shí)間等可根據(jù)具體待測樣品進(jìn)行考察優(yōu)化。

其中，以HPLC-MS測定的化合物的數(shù)量和主要化合物的含量為考察指標(biāo)，通過對(duì)天龍通絡(luò)膠囊樣品進(jìn)行了提取溶劑類型(甲醇、乙醇、水、50％甲醇-水和50％乙醇-水)、提取溶劑的組成(10％、30％、50％、70％和90％的乙醇-水)、料液比(1∶5、1∶20、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280、1∶2560)、提取溫度(20℃、30℃、40℃、50℃)、提取時(shí)間(30min，60min，90min，120min)等的考察，優(yōu)選提取條件。

進(jìn)一步的，天龍通絡(luò)膠囊的提取條件優(yōu)選為50％乙醇-水超聲提取30min，提取溫度20℃，料液比1∶320。

(2)將天龍通絡(luò)膠囊樣品溶液進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)分離。其中，樣品溶液可采用高速離心或0.2μm濾膜過濾等方式進(jìn)行樣品進(jìn)樣前處理；其中，色譜柱采用C18為固定相；流動(dòng)相包含且不限于甲醇、乙腈，不同濃度的含酸、或含堿、或含緩沖鹽等水溶液；柱溫、流速、進(jìn)樣體積、流動(dòng)相組成及梯度洗脫條件根據(jù)所用的色譜柱可適當(dāng)調(diào)整。