[發明專利]一種用于熒光定量PCR檢測結核分枝桿菌復合群的引物探針及方法

在審

• 申請號: 201910060901.2
• 申請日: 2019-01-23
• 公開（公告）號: CN109680084A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 馬彩霞;暢志強
• 申請（專利權）人: 北京岱美儀器有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于熒光定量PCR檢測結核分枝桿菌復合群的引物，其特征在于，包括兩套上游引物和下游引物，其序列分別如下：

上游引物IS-F1：5’-CCTGCGAGCGTAGGCGTCGG-3’(SEQ ID NO：1)

下游引物IS-R1：5’-CTCGTCCAGCGCCGCTTCGG-3’(SEQ ID NO：2)

上游引物IS-F2：5’-GCCGAACAACACGACGAATGGA-3’(SEQ ID NO：3)

下游引物IS-R2：5’-GGTGGCAGTCTAGGTGGTCAGT-3’(SEQ ID NO：4) 。

2.包含權利要求1所述引物的結核分枝桿菌復合群熒光定量PCR檢測試劑，其特征在于，包括如下組分：

上游引物IS-F1、IS-F2，下游引物IS-R1、IS-R2和探針IS-FAM1、IS-FAM2；

所述探針的序列如下：

探針IS-FAM1：5’-F-AGGCCACGTAGGCGAACCCTGCCC-Q-3’(SEQ ID NO：5)

探針IS-FAM2：5’-F-ACGGCGCTACCTGGGCCTCGAGG-Q-3’(SEQ ID NO：6)

其中F＝FAM Q＝BQ1 。

3.根據權利要求2所述的結核分枝桿菌復合群熒光定量PCR檢測試劑，其特征在于，所述25μL檢測試劑中，含有10μM上游引物IS-F1，10μM上游引物IS-F2，10μM下游引物IS-R1，10μM下游引物IS-R2，8μM探針IS-FAM1，8μM探針IS-FAM2。

4.根據權利要求2-3任一項所述檢測試劑熒光定量PCR檢測結核分枝桿菌復合群的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將待檢測基因樣本與PCR Mix以及所述檢測試劑混合，放置在熒光定量PCR儀器中，PCR擴增程序采用touchdown的程序，具體為：

Touchdown循環程序：94℃ 10S，71℃ 15S(每個循環下降1℃)，72℃ 15S，共10個循環，接著40個循環，94℃ 10S，61℃ 30S(進行FAM熒光檢測)，72℃ 15S。

5.根據權利要求4所述的熒光定量PCR檢測結核分枝桿菌復合群的方法，其特征在于，所述儀器為熒光定量PCR儀器。