[發明專利]一種托莫西汀中間體的酶催化合成方法有效
| 申請號： | 201910054868.2 | 申請日： | 2019-01-21 |
| 公開（公告）號： | CN109706191B | 公開（公告）日： | 2022-09-09 |
| 發明（設計）人： | 陳本順;江濤;何偉;毛玲妙 | 申請（專利權）人： | 南京歐信醫藥技術有限公司 |
| 主分類號： | C12P7/22 | 分類號： | C12P7/22 |
| 代理公司： | 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288 | 代理人： | 呂鵬濤 |
| 地址： | 210046 江蘇省南京*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 托莫西汀 中間體 催化 合成 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種托莫西汀中間體的酶催化合成方法，其特征在于，具體步驟如下：
于 250ml 反應器中，加入55ml濃度為0.1mM、pH 為7.0的PB 緩沖液，依次溶解800mg酮羰基還原酶，200mg 異丙醇脫氫酶酶粉，15mgNADP+/NADPH；1g 底物1-苯基-3-丁烯-1-酮溶于45ml 異丙醇中，加入反應器，600rpm 攪拌，于25℃下反應24h，得到(S)-1-苯基-3-丁烯-1-醇；反應結果經HPLC 檢測，轉化率95.9%，ee值99.8%；
所述的酮羰基還原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1 所示；所述的酮羰基還原酶通過酮羰基還原酶表達工程菌發酵制得，具體步驟為：將酮羰基還原酶的合成基因導入pet-28a(+)的Hind Ⅲ和EcoRⅠ酶切位點得到重組表達質粒，再將重組表達質粒轉入E.coli DH5α感受態，挑取陽性轉化子并測序鑒定后，得到重組表達載體，最后將重組表達載體轉入E.coliBL21 中，得到酮羰基還原酶表達工程菌，發酵培養，離心收集菌體，洗滌并重懸，超聲破碎，凍干得到酮羰基還原酶。
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