[發明專利]一種胃幽門螺桿菌特異性分子標記及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910054596.6
• 申請日: 2019-01-21
• 公開（公告）號: CN109536628B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 宋志強;周麗雅
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院（北京大學第三臨床醫學院）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6834;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 覃婧嬋

本發明涉及一種胃幽門螺桿菌特異性分子標記及其檢測試劑盒，本試劑盒依據PCR?反向點雜交法檢測原理對胃粘膜、胃液、糞便以及咽拭子等樣本中的胃幽門螺桿菌進行特異性檢測。本胃幽門螺桿菌特異性分子標記針對的靶基因為尿素酶ureH基因。本試劑盒大大提高了臨床檢驗胃幽門螺桿菌的靈敏度，并且可以對幽門螺桿菌感染者，尤其是老人、兒童進行無創性篩查，從而可以早發現、早治療；另外在其它幽門螺桿菌的基因比如：cag、vec以及其它耐藥基因的檢測上，其可以作為陽性參照，監控其它基因在基因組提取、PCR以及雜交的所有過程。

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種胃幽門螺桿菌特異性分子標記及檢測試劑盒，特別涉及一種運用PCR-反向點雜交法檢測胃幽門螺桿菌的試劑盒。

背景技術

我國是幽門螺桿菌(Hp)感染重災區，感染率高達40％-60％，共餐制和少數欠發達地區的飲食習慣以及衛生環境欠佳，使得兒童感染率達到了30％-40％。大部分成人Hp感染在兒童期獲得，大多發生在兒童早期，感染后一般難以自發清除而導致終生感染。因此，對于Hp的篩查以及治療研究對于降低Hp的感染率，提高Hp的根治率非常重要。

目前對于Hp的篩查主要有以下幾種手段：1、C13呼氣試驗，其技術原理是通過口服C-13尿素膠囊，進入胃部后，如果胃部存在幽門螺桿菌，則此菌就會分解尿素酶水解尿素，尿素被水解后形成CO₂(二氧化碳)隨血液進入肺部并以氣體排出，然后檢測患者呼出的氣體中有沒有被標記的C-13，如果有的話，代表存在幽門螺桿菌，這種方法比較簡單而且快捷，這種方法是目前大多數Hp診斷和篩查所使用的方法，對兒童的篩查，這種方法還需謹慎使用，并且兒童并不愿意服用。2、RUT以及免疫組化染色，這兩種方法都需要下胃鏡取胃粘膜，對樣品進行染色分析，這種給患者帶來非常大的痛苦，尤其是對老人和兒童。3、Hp抗體檢測，這種利用免疫方法識別Hp抗體的方法，靈敏度非常低。

針對現有技術中對胃幽門螺桿菌檢測技術的不足，有必要提供一種能夠特異性檢測胃幽門螺桿菌的分子標記及其檢測試劑盒，從而能夠特異性檢測胃幽門螺桿菌。

發明內容

本發明的目的是提供一種胃幽門螺桿菌特異性分子標記及檢測試劑盒，并依據PCR-反向點雜交法原理實現對幽門螺桿菌的特異性檢測，解決現有技術中存在的對幽門螺桿菌進行有創檢測，不適用于兒童及老人、靈敏度不夠等問題，本發明的分子標記及試劑盒還能夠在其它幽門螺桿菌基因如cag、vec以及其它耐藥基因檢測上作為陽性參照，從而監控其它基因在基因組提取、PCR以及雜交的所有過程，促進對幽門螺桿菌進一步深入研究。

進一步地，本發明的目的是提供一種胃幽門螺桿菌特異性分子標記，所述分子標記的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其為尿素酶ureH的核苷酸片段。

進一步地，本發明的目的是提供檢測權利要求1所述分子標記的引物組，所述引物組可以由核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的引物HP-FB及核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的引物HP-R組成。

進一步地，本發明的目的是提供特異性檢測胃幽門螺桿菌特異性分子標記的核酸探針，所述核酸探針的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

進一步地，本發明的目的是提供一種利用PCR-反向點雜交法檢測胃幽門螺桿菌的檢測試劑盒，所述試劑盒由試劑盒I和試劑盒II組成。

試劑盒I包括PCR反應液、HRP組分、陽性質控品及陰性質控品，其中，PCR反應液包括的組分為：Taq酶、1×Taq Buffer，dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)，擴增引物；HRP組分包括HRP、磷酸緩沖液(pH7.5)、甘油；陽性質控品包括含Rnase P、Ure H基因片段的質粒(均為10⁵拷貝/μL)，溶液為10mM Tris，1mM EDTA，pH8.0；陰性質控品包括只含Rnase P基因片段質粒(10⁵拷貝/μL)，溶液為10mM Tris，1mM EDTA，pH8.0。