[發明專利]一種基于建模-預測策略的靶標脂質組學方法

有效

• 申請號: 201910053337.1
• 申請日: 2019-01-21
• 公開（公告）號: CN109725046B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 李清;畢開順;劉然;許華容;張倩;于鑫淼;韓濤
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 沈陽飛揚靈睿知識產權代理事務所(普通合伙) 21255
• 代理人: 靳玲

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種靶標脂質組學方法，更確切地說是一種應用“建模?預測”的策略對血漿中溶血磷脂膽堿(LPC)進行高效靈敏地定性定量分析。本發明以碳鏈長度(x1)和雙鍵個數(x2)為自變量，去簇電壓(DP)，碰撞能(CE)，保留時間(RT)，響應因子(RF)為因變量建立多元線性回歸模型，總結LPC(13:0)，LPC(14:0)，LPC(15:0)，LPC(17:0)LPC(18:1)LPC(19:0)LPC(20:0)對照品的液相質譜參數規律，然后用該方程預測無法獲得對照品的LPC的相應參數。使用預測出來的液相質譜參數對血漿中的LPC進行定量分析，并通過獨立樣本T檢驗、PLS?DA、單因素ROC曲線篩選不同癌癥的生物標志物，通過多因素ROC曲線評價其診斷能力。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種靶標脂質組學方法，更確切地說是一種應用“建模-預測”的策略對血漿中溶血磷脂膽堿（LPC）進行高效靈敏地定性定量分析。背景技術

脂質是生物膜的骨架成分，是參與生物的生命活動、為生物提供能量的重要物質。脂質組學屬于代謝組學的重要分支，是對生物體內的脂類物質進行系統的分析，研究其相互作用以及與其他生物分子的作用，進而揭示脂質代謝與生物體的生理、病理過程之間關系的一門新興學科。由于脂質骨架、基團和碳鏈的多樣性，體內存在著大量具有不同理化性質和動態范圍的脂類化合物，一個方法是不可能全面準確地定性定量所有脂類的。因此，我們可以根據脂類的骨架將其分為幾個子類，然后利用優化的內標、前處理方法和LC-MS/MS條件去更準確地定量一個或幾個特定的脂質亞類，從而提供更準確的生物學解釋。

由于脂質的多樣性和不穩定性，脂質的對照品很難獲得，這使得脂質的準確定量成為一個重大難題。因此，亟需提出一種策略和方法來解決這個難題。

發明內容

本發明的第一個目的是克服現有技術的缺陷，采用“建模-預測”的策略，建立血漿中溶血磷脂膽堿的分析方法。

本發明的第二個目的是通過建立的分析方法測定溶血磷脂膽堿的濃度。

本發明的第三個目的是通過建立的分析方法測定健康人和癌癥患者血漿中的60種溶血磷脂膽堿的濃度，并通過獨立樣本t-檢驗、PLS-DA、單因素和多因素ROC分析篩選出了不同癌癥的生物標記物。

本發明是這樣實現的：

（1）“建模-預測”策略：

首先以碳鏈長度(x1)和雙鍵個數(x2)為自變量，去簇電壓(DP)，碰撞能(CE)，保留時間(RT)，響應因子(RF)為因變量建立多元線性回歸模型，總結LPC（13:0），LPC（14:0），LPC（15:0），LPC（17:0），LPC（18:1），LPC（19:0），LPC（20:0）對照品的液相質譜參數規律，得到回歸模型方程，然后用該方程預測無法獲得對照品的LPC的相應參數。

（2）血漿樣品預處理：

取血漿樣品，加入甲醇、內標溶液，渦旋，超聲離心，取上清液進行LC -MS 分析。

其中，所述的內標溶液是LPC (13:0)；

所述的血漿與甲醇的體積比為：1:3-1:5。

（3）液相分離：

色譜柱: Kinetex XB-C18（4.6×100 mm, 2.6 μm）；

流動相: A相: 0.1-0.3%甲酸水， B相: 0.1-0.3%甲酸甲醇；

流速: 0.4 ml·min^-1；

進樣量: 2 μl；

柱溫: 25^oC；

梯度洗脫程序見表1。