[發(fā)明專利]一種野生獼猴桃天然多肽的制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)日: 2019-01-21
• 公開（公告）號(hào): CN111454322A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 菅曉勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京中科唯新生物醫(yī)學(xué)研究所有限公司
• 主分類號(hào): C07K1/14
• 分類號(hào): C07K1/14;C07K1/16;C07K1/00;A23L33/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了一種野生獼猴桃天然多肽的制備方法,包括如下步驟：將野生獼猴桃洗凈后去皮，果肉切成丁，然后在低溫下勻漿并于低溫下靜置12小時(shí)，離心后的上清提取液經(jīng)凝膠層析分離純化，收集分子量在500?12000道爾頓的部分即為野生獼猴桃天然多肽，該部分天然多肽收集液經(jīng)真空冷凍干燥，得野生獼猴桃天然多肽粉。本發(fā)明提供的制備方法所得野生獼猴桃天然多肽分子量較低，保留了較高的天然活性，可以用于制備保健食品及食品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域，具體涉及一種野生獼猴桃天然多肽及其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

野生獼猴桃是一種無污染，天然的綠色食品，含有獼猴桃堿、蛋白水解酶、單寧果膠和糖類等有機(jī)物，以及鈣、鉀、硒、鋅、鍺等微量元素和人體所需17種氨基酸，此外還含有豐富的維生素C、葡萄酸、果糖、檸檬酸、蘋果酸、脂肪。野生獼猴桃具備豐富的醫(yī)藥功效、食療價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值，對(duì)保持人體健康，防病治病具有重要的作用。多食用野生獼猴桃可以預(yù)防老年骨質(zhì)疏松，抑制膽固醇的沉積，從而防治動(dòng)脈硬化，還可改善心肌功能,防治心臟病等，也能對(duì)抗癌起到作用。但因野生獼猴桃果實(shí)較小、不耐儲(chǔ)藏等缺陷導(dǎo)致其價(jià)值未被有效挖掘。

肽類分為寡肽和多肽，是由兩個(gè)或兩個(gè)以上氨基酸縮合并以肽鍵相連的一類生物活性物質(zhì)。肽類與生物體內(nèi)其它物質(zhì)相比，其最大的特點(diǎn)是它們具有很高的生物活性和多樣性。在生物體內(nèi)，很多生物活性物質(zhì)大都是以多肽的分子結(jié)構(gòu)及天然構(gòu)象形式存在，同時(shí)也以天然生物活性的作用方式在機(jī)體發(fā)揮著重要的效應(yīng)。多肽在生物體的生長發(fā)育和新陳代謝中起著至關(guān)重要的作用。活性生物多肽可以調(diào)控細(xì)胞的生命活動(dòng)以確保細(xì)胞正常分裂和蛋白質(zhì)正常合成，因此對(duì)細(xì)胞分裂、分化、修復(fù)起重要作用。因此活性生物多肽與人類健康、抗衰老及延年益壽等密切相關(guān)且意義重大。近年來的科學(xué)研究證實(shí)，人體所吸收蛋白質(zhì)的主要形式不都是氨基酸，而是活性生物肽，因此可以通過補(bǔ)充活性生物多肽的方式調(diào)理健康，抵抗疾病和衰老。

目前多肽的提取制備方法很多，包括酸水解法、堿水解法、酶水解法以及幾種方法結(jié)合應(yīng)用等方法。然而，保留天然活性的多肽的提取，即在不改變這些化合物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的條件下，盡量將提取物中的雜質(zhì)分離出來，需要較為溫和的提取條件。單純的酸解或堿解及酶解法提取多肽，若所選擇的溶液體系酸性或堿性太強(qiáng)，都可能使被提取物發(fā)生不可逆變性或過度水解以及分子構(gòu)象等發(fā)生明顯改變，使其逐步失去了多肽的生物學(xué)活性和功能。而且，為了阻止酶解法在完成多肽提取后所加入的蛋白酶繼續(xù)發(fā)生水解、通常需要煮沸進(jìn)行滅酶活，這樣可能在一定程度上造成多肽生物活性的降低或破壞。

重要的是上述方法都是通過分解蛋白來實(shí)現(xiàn)得到多肽，總體上操作步驟繁瑣，引入介質(zhì)較多，所得多肽的生物活性存在較多問題。本方法提供了一種能夠從生物組織中直接提取天然多肽的簡便的多肽制備方法，該方法提取條件溫和，分離條件采取生理?xiàng)l件，所得多肽能夠保留其天然活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種從生物組織中直接提取天然多肽，并且能夠保留多肽天然活性的簡便的多肽制備方法，以至少解決現(xiàn)有技術(shù)中多肽提取方法復(fù)雜的技術(shù)及天然活性保留的問題。

本發(fā)明提供了一種野生獼猴桃天然多肽的制備方法,其特征在于其包括如下步驟：

（1）將新鮮野生獼猴桃洗凈去皮，果肉切丁，2-8℃冰浴下勻漿，然后加入預(yù)冷過的野生獼猴桃重量1-3倍的0.02-0.2摩爾/升（mol/L） pH6.0-7.2的磷酸鹽緩沖液浸泡，置于2-8℃冰箱12小時(shí)后，2-8℃冷凍離心，上清即為含有野生獼猴桃天然多肽粗提液；

（2）向步驟（1）所得含有野生獼猴桃天然多肽的粗提液中加入洗脫液將其稀釋至為含多肽30-100毫克/毫升（mg/mL）的溶液，用葡聚糖凝膠層析分離，收集分子量野生獼猴桃500-12000道爾頓（D）的組分；

（3）將步驟（2）中的野生獼猴桃天然多肽收集液冷凍干燥，即得到野生獼猴桃天然多肽提取物凍干粉。