[發明專利]一種大豆乳清廢水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法

有效

• 申請號: 201910050784.1
• 申請日: 2019-01-20
• 公開（公告）號: CN109852591B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 張志國
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

1.一種大豆乳清廢水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于，包括步驟：

1）大豆乳清廢水預處理

將大豆乳清廢水進行離心去除大顆粒的雜質，保留上清液作為大豆乳清廢水預處理液；

2）去除大豆乳清廢水預處理液中的雜蛋白

將大豆乳清廢水預處理液的pH調節至7.8~8.2，離心除去沉淀；

3）提取脂肪氧合酶

將步驟2）離心所得的上清液的pH值調節至5.7~6.0，離心去除上清液，所得沉淀物用蒸餾水溶解，即為脂肪氧合酶粗酶液；

還包括步驟4），脂肪氧合酶粗酶液利用超濾濃縮的方法初步提純；

還包括步驟5），步驟4）所得酶液利用凝膠過濾色譜法進一步提純，得到純的脂肪氧合酶；步驟5）中凝膠過濾色譜法利用2-70KDa 的Sephadex G-75凝膠柱，以pH7.8，0.02mol/L的磷酸緩沖液平衡2~3個柱體積，平衡完畢后上樣，以pH7.8，0.02mol/L的磷酸緩沖液為洗脫液洗脫；洗脫液流速為0.5mL/min；

步驟4）中，利用30KDa大小的改性聚醚砜超濾膜，在壓力200~300KPa下對脂肪氧合酶粗酶液進行8~10倍超濾濃縮；

步驟2）中，將大豆乳清廢水預處理液的pH調節至8.0；

步驟3）中，上清液的pH值調節至6.0。

2.如權利要求1所述大豆乳清廢水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于：步驟4）中，利用超濾系統采用兩級過濾方式進行超濾濃縮。

3.如權利要求1所述大豆乳清廢水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于：步驟2）和步驟3）中，利用氫氧化鈉溶液調節體系的pH。

4.如權利要求1所述大豆乳清廢水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于：步驟1）中，以3000~15000r/min的轉速離心8~20min。