[發明專利]一種酶催化氧化型煙酰胺輔酶的再生方法及應用

有效

• 申請號: 201910049344.4
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109666713B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 李寧;賈浩宇;宗敏華
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P19/36
• 分類號: C12P19/36
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

1.一種酶催化氧化型煙酰胺輔酶及其結構類似物的再生方法，其特征在于，具體步驟如下：將還原型煙酰胺輔酶或其結構類似物BNAH加入pH為6.0～8.0的緩沖液中，混合均勻，再加入0.1～2.0 mg/mL血紅素蛋白、0～0.4 mM介體及0.1～15 mM過氧化氫，于25～40℃下反應，得到相應的氧化型輔酶或其結構類似物；

所述緩沖液為磷酸鹽或甘氨酸-NaOH緩沖液；

所述血紅素蛋白為肌紅蛋白或細胞色素C；

所述介體為莨菪亭、愈創木酚或對乙酰氨基酚。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述還原型煙酰胺輔酶為NADH、NADPH；其濃度為0.001～1 mM；所述緩沖液的pH為7.0～8.0，且含有0～2%二甲基亞砜。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述血紅素蛋白的濃度為1.0～1.5mg/mL。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述介體的濃度為0.01～0.2mM；所述過氧化氫濃度為5～10 mM。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的方法，其特征在于，所述反應溫度為30～35℃。

6.一種酶催化氧化型煙酰胺輔酶及其結構類似物再生方法在脫氫酶催化氧化反應中的應用，其特征在于，包括如下步驟：將0.1～2.0 mg/mL血紅素蛋白、0～0.4 mM介體、0.001～1.0 mM煙酰胺輔酶或其結構類似物BNAH、過氧化氫、脫氫酶及其底物加入pH為6.0～8.0的緩沖液中，于25～40℃攪拌條件下，反應24～60 h，得到目標產物；

所述緩沖液為磷酸鹽或甘氨酸-NaOH緩沖液；

所述血紅素蛋白為肌紅蛋白或細胞色素C；

所述介體為莨菪亭、愈創木酚或對乙酰氨基酚。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述脫氫酶為葡萄糖脫氫酶、L-谷氨酸脫氫酶、L-乳酸脫氫酶或馬肝醇脫氫酶；其濃度為2.5～200U/mL；所述的底物為相應脫氫酶對應的底物葡萄糖、L-谷氨酸鈉、L-乳酸鈉或糠醇，其濃度為10～500 mM。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述煙酰胺輔酶或其結構類似物的濃度為0.01～0.1 mM；所述血紅素蛋白的濃度為1.0～1.5 mg/mL；所述緩沖液含有0～2%二甲基亞砜。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述過氧化氫與底物摩爾比介于10:1～1:4；過氧化氫的添加方式為多次分批添加；所述反應溫度為30～35℃。

10.根據權利要求6～9任意一項所述的應用，其特征在于，在產生酸產物的反應體系中加入碳酸鈣。