[發(fā)明專利]脂肪間充質干細胞因子凍干粉及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910049287.X
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109627315B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 黃燕飛;車七石;劉少輝
• 申請（專利權）人: 廣州潤虹醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C07K1/34;A61K38/18;A61K9/19;A61K47/10;A61K47/36;A61K47/22;A61K47/18;A61K47/12;A61K47/20;A61P17/02
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭彤

1.一種脂肪間充質干細胞因子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取脂肪組織，酶解消化、培養(yǎng)得脂肪間充質干細胞；

(2)傳代3～5次，即至P3～P5代后，置于低氧環(huán)境中培養(yǎng)1～3h，并對細胞進行機械牽拉；

(3)恢復正常氧氣濃度，繼續(xù)培養(yǎng)；

(4)收集細胞上清液，超濾透析，收集截留液，即得脂肪間充質干細胞因子；

步驟(2)中所述的置于低氧環(huán)境中培養(yǎng)為：于氧氣濃度為(5±0.5)％的條件下培養(yǎng)；

所述對細胞進行機械牽拉的方法為：

傳代時將細胞轉移至機械牽拉細胞培養(yǎng)盒中，細胞貼壁附著于機械牽拉細胞培養(yǎng)盒的彈性膜上生長；所述機械牽拉包括：一次將彈性膜拉長10％～20％。

2.根據(jù)權利要求1所述的脂肪間充質干細胞因子的制備方法，其特征在于，所述低氧環(huán)境中二氧化碳的濃度為(5±0.5)％。

3.根據(jù)權利要求1所述的脂肪間充質干細胞因子的制備方法，其特征在于，所述機械牽拉包括：一次將彈性膜拉長15％。

4.根據(jù)權利要求1～3任一項所述的脂肪間充質干細胞因子的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的酶解消化為：于37℃消化2～4h。

5.根據(jù)權利要求1～3任一項所述的脂肪間充質干細胞因子的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述的超濾透析為：通過30～50KD的超濾膜進行超濾透析，取透析液；再將透析液通過90～110D超濾膜，收集截流液。

6.一種脂肪間充質干細胞因子凍干粉的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將如權利要求1～5任一項所述制備得到的脂肪間充質干細胞因子的濃縮液，加入凍干保護劑，凍干，即得。

7.根據(jù)權利要求6所述的脂肪間充質干細胞因子凍干粉的制備方法，其特征在于，所述加入凍干保護劑為：每100mL所述脂肪間充質干細胞因子的濃縮液中，加入以下組分：2～7g聚乙二醇、1～5g魔芋糖、0.1～1g脯氨酸、0.5～1.5g谷胱甘肽、0.01～0.05g苯甲酸鈉、0.1～0.5g十二烷基磺酸鈉、0.2～0.8g四氫嘧啶。

8.根據(jù)權利要求6或7所述的脂肪間充質干細胞因子凍干粉的制備方法，其特征在于，所述凍干的條件為：以9～11℃/min的速度降至-60～-45℃，維持冷凍1～3小時；后置于真空冷凍干燥機中于壓強10～50Pa，溫度-38～35℃的條件下凍干20～48h。

9.一種脂肪間充質干細胞因子凍干粉，其特征在于，如權利要求6～8任一項所述的制備方法制備得到。

10.如權利要求9所述的脂肪間充質干細胞因子凍干粉在制備促進傷口愈合的藥物或醫(yī)用材料中的應用。