[發(fā)明專利]D-半乳糖誘導(dǎo)的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的構(gòu)建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910048963.1
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109845695A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓慧;尹杰;李鐵軍;段葉輝;劉澤民;印遇龍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A23K50/30;A23K20/163;A23K50/60
• 代理公司: 南昌匯智合誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36130
• 代理人: 鄧秋星

本發(fā)明涉及D?半乳糖誘導(dǎo)的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的建立方法，采用D?半乳糖體外誘導(dǎo)處理斷奶仔豬，D?半乳糖飼喂量為5?20g/kg 體重（BW）。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次采用D?半乳糖作為應(yīng)激源誘導(dǎo)斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型，通過考察斷奶仔豬血清過氧化產(chǎn)物（MDA）水平以及抗氧化酶（GSH?Px、CAT和SOD）的活性確定了D?半乳糖誘導(dǎo)斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激的最佳飼喂量和時(shí)間，操作簡單、操作過程對動物應(yīng)激較小，可幫助進(jìn)行斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激的研究人員比較順利地完成氧化應(yīng)激模型的構(gòu)建。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物慢性氧化應(yīng)激模型技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及D-半乳糖誘導(dǎo)的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

過多的氧自由基破壞機(jī)體氧化和抗氧化防御系統(tǒng)之間的動態(tài)平衡，使機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激。畜禽養(yǎng)殖過程中的一些問題，例如轉(zhuǎn)群、運(yùn)輸、氣味、溫度和噪音等均可引起機(jī)體氧化應(yīng)激；同時(shí)，相比急性氧化應(yīng)激，慢性氧化應(yīng)激的刺激強(qiáng)度相對減弱、刺激時(shí)間延長和頻率增加，因此，慢性氧化應(yīng)激更加常見和多發(fā)。

目前常見的用于構(gòu)建仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的主要方法有飼喂氧化油脂和注射敵草快。但是，氧化油脂的制作和使用過程條件難控制，同時(shí)產(chǎn)物種類復(fù)雜、含量差異大，研究結(jié)果差異較大。其次，注射敵草快會使仔豬出現(xiàn)厭食或腹瀉較為嚴(yán)重的應(yīng)激，影響后續(xù)的試驗(yàn)結(jié)果。D-半乳糖主要通過三條途徑引起氧化應(yīng)激：過量D-半乳糖在半乳糖還原酶的作用下被還原成無法被細(xì)胞進(jìn)一步代謝的半乳糖醇，過量的半乳糖醇在細(xì)胞內(nèi)堆積，影響細(xì)胞的滲透壓，使細(xì)胞腫脹，進(jìn)一步引起細(xì)胞代謝紊亂，從而引起氧化應(yīng)激；過量D-半乳糖在半乳糖氧化酶的作用下被氧化生成過氧化氫，過多的過氧化氫可以消耗細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶，如超氧化物歧化酶，進(jìn)而引起氧化應(yīng)激；過量D-半乳糖可以引起非酶促糖基化反應(yīng)，產(chǎn)生晚期糖基化終產(chǎn)物，晚期糖基化終產(chǎn)物與其受體結(jié)合，進(jìn)一步產(chǎn)生活性氧自由基，使機(jī)體處于氧化應(yīng)激的狀態(tài)。因此，利用D-半乳糖是建立穩(wěn)定的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的適宜應(yīng)激源。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定的和易于操作的D-半乳糖誘導(dǎo)的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的建立方法。

為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：D-半乳糖誘導(dǎo)的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的建立方法，采用D-半乳糖飼喂斷奶仔豬，D-半乳糖的飼喂量為5-20g/kgBW。

所述D-半乳糖誘導(dǎo)的斷奶仔豬慢性氧化應(yīng)激模型的建立方法，分別設(shè)斷奶仔豬對照組、5g/kg BW D-半乳糖組、10g/kg BW D-半乳糖組和20g/kg BW D-半乳糖組。對照組斷奶仔豬飼喂基礎(chǔ)日糧，實(shí)驗(yàn)組斷奶仔豬分別在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上飼喂含量不同的D-半乳糖，自由采食和飲水，記錄每日采食量，于處理期第0、7、14和21天分別稱重，并采集斷奶仔豬前腔靜脈血，3000r/min，4℃離心10min，收集血清，測定血清過氧化產(chǎn)物水平和抗氧化酶活性；處理第21天，采集血液后，將斷奶仔豬處死并立即打開腹腔，分離心臟、肝臟、脾臟和腎臟，稱重并計(jì)算各器官指數(shù)。

所述斷奶仔豬為21日齡斷奶仔豬。

所述D-半乳糖飼喂量由每周仔豬的體重進(jìn)行調(diào)整，即D-半乳糖的飼喂量由處理期第0、7和14天的體重確定；

試驗(yàn)組和對照組斷奶仔豬自由采食，保證試驗(yàn)組每頭仔豬每天能采食到相應(yīng)量的D-半乳糖。

所述血清中過氧化產(chǎn)物為丙二醛（MDA）；

所述血清中抗氧化酶包括過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）。

有益效果：