[發明專利]一種游動球菌耐鹽堿基因mceT及其鑒定方法有效
| 申請號： | 201910048713.8 | 申請日： | 2019-01-18 |
| 公開（公告）號： | CN109628474B | 公開（公告）日： | 2021-02-09 |
| 發明（設計）人： | 姜巨全;徐桐;邵麗;孟琳;張瑞;張正來;洪閃;鄒俏;鄭秀桃;郭思伽;王玉婷 | 申請（專利權）人： | 東北農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/31 | 分類號： | C12N15/31;C07K14/195;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 成都東恒知盛知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51304 | 代理人： | 何健雄 |
| 地址： | 150030 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 游動 球菌 鹽堿 基因 mcet 及其 鑒定 方法 | ||
1.一種游動球菌耐鹽堿基因mceT，其特征在于，所述的游動球菌耐鹽堿基因mceT，是一個921bp的完整開放閱讀框ORF，ORF的核苷酸序列為SEQ ID NO.1。
2.一種利用權利要求1所述游動球菌耐鹽堿基因mceT編碼的蛋白，其特征在于，所述的蛋白氨基酸序列為SEQ ID NO.2。
3.一種如權利要求1所述游動球菌耐鹽堿基因mceT的鑒定方法，其特征在于，所述游動球菌耐鹽堿基因mceT的鑒定方法包括以下步驟：
(1)通過基因文庫與基因功能互補相結合的篩選技術，從保藏編號CGMCC1.12151的游動球菌中獲得含有耐鹽堿相關的基因片段，所述的耐鹽堿相關的基因片段是一個長921bp的mceT基因的完整開放閱讀框ORF，ORF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1；
(2)構建含有游動球菌耐鹽堿基因mceT基因的原核表達載體；
(3)通過轉化異源宿主
4.一種利用權利要求1所述游動球菌耐鹽堿基因mceT構建的原核表達載體，其特征在于，所述原核表達載體為pTrcHisB-mceT。
5.一種如權利要求4所述原核表達載體的構建方法，其特征在于，所述原核表達載體pTrcHisB-mceT的構建方法包括：
根據mceT基因序列，首先設計引物，并在基因的5’和3’端分別引入BamHI和HindIII兩個酶切位點，然后進行mceT基因的PCR擴增，對mceT基因進行亞克隆；
將PCR擴增產物酶切純化后連接到表達載體pTrcHisB上，轉化到KNabc感受態細胞中，將轉化產物進行藍白斑篩選；對得到的轉化子進行測序。
6.一種權利要求2所述蛋白的突變體，其特征在于，所述蛋白的突變體只具有促進Zn2+吸收能力，所述突變為Q150A、S158A。
7.一種權利要求2所述蛋白的突變體，其特征在于，所述蛋白的突變體只具有耐鹽功能，所述突變為D41A、D154A。
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