[發明專利]一種抑制Th17細胞活化的間充質干細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910047912.7
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109810947A
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 劉擁軍;劉廣洋;張晨亮;王皓
• 申請（專利權）人: 北京貝來生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K14/715;C12N15/867;A61K35/28;A61K38/20;A61P19/06;A61P29/00;A61P19/02;A61P11/00;A61P1/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營;陳辰

1.一種能夠抑制Th17細胞活化的間充質干細胞，其特征在于，所述間充質干細胞通過基因修飾的方法，特異表達人白介素23受體類似物，從而競爭性抑制IL-23與IL-23受體的結合；所述人白介素23受體類似物為人白介素23受體胞外區與免疫球蛋白G1的Fc片段的融合蛋白，所述人白介素23受體胞外區由人白介素23受體信號肽以及N-端結構域組成，所述IgG1的Fc片段包括IgG1的重鏈恒定區CH2、CH3以及鉸鏈區，所述人白介素23受體信號肽的氨基酸序列如SEQ ID No: 1所示，所述N-端結構域的氨基酸序列如SEQ ID No: 2所示，所述人免疫球蛋白G1的Fc片段序列如SEQ ID No:3所示。

2.根據權利要求1中所述的間充質干細胞，其特征在于，編碼所述人白介素23受體類似物的基因，全長為1740bp，編碼580個氨基酸，分子量約為66.2 kD，包括IL23受體胞外區編碼基因、免疫球蛋白G1的Fc片段的編碼基因。

3.根據權利要求1中所述的間充質干細胞，其特征在于，所述基因修飾為病毒轉染技術。

4.根據權利要求1中所述的間充質干細胞，其特征在于，所述基因修飾為慢病毒轉染技術。

5.根據權利要求1中所述的間充質干細胞，其特征在于，所述基因修飾為第四代慢病毒轉染技術。

6.根據權利要求1-5任一項中所述的間充質干細胞，其特征在于，所述間充質干細胞為骨髓組織、脂肪組織、臍帶組織或胎盤組織來源的間充質干細胞。

7.一種權利要求1-6任一項中所述的間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

（1）利用病毒載體系統構建人白介素23受體類似物病毒表達質粒，所述人白介素23受體類似物為人白介素23受體胞外區與免疫球蛋白G1的Fc片段的融合蛋白，所述人白介素23受體胞外區由人白介素23受體信號肽以及N-端結構域組成，所述IgG1的Fc片段包括IgG1的重鏈恒定區CH2、CH3以及鉸鏈區，所述人白介素23受體信號肽的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示，所述N-端結構域的氨基酸序列如SEQ ID No: 2所示，所述人免疫球蛋白G1的Fc片段序列如SEQ ID No:3所示；

（2）將所述人白介素23受體類似物病毒表達質粒導入T細胞，收獲病毒；以及

（3）將收獲的病毒轉染至間充質干細胞，篩選被病毒轉染的間充質干細胞，其高表達人白介素23受體類似物。

8.根據權利要求7所述的間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

（1）利用第四代慢病毒載體系統構建人白介素23受體類似物慢病毒表達質粒，

（2）將所述人白介素23受體類似物慢病毒表達質粒分別與慢病毒pGag/Pol、pRev、pVSV-G框架質粒混合，通過LTX脂質體導入293T細胞，包裝得到成熟慢病毒，收獲病毒；

（3）將收獲的病毒轉染至間充質干細胞，24h后加入嘌呤霉素篩選被病毒轉染的間充質干細胞，其高表達人白介素23受體類似物。

9.根據權利要求1-6任一項所述的間充質干細胞在制備治療免疫性疾病的藥物中的應用；所述免疫性疾病為人銀屑病、炎癥性腸病。