[發(fā)明專利]一種可識別蛋白質的分子印跡水凝膠修飾電極的制備方法

有效

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• 申請日: 2019-01-17
• 公開（公告）號: CN109632922B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發(fā)明（設計）人: 趙孔銀;齊夢;白甜;楊正春;鮑奇文;夏倫;馮薈如;王慧泉;魏俊富
• 申請（專利權）人: 天津工業(yè)大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可識別蛋白質的分子印跡水凝膠修飾電極的制備方法，其特征是包括以下步驟：

a)將用無水乙醇清洗后的絲網(wǎng)印刷技術制備的裸碳電極浸泡到質量百分比為0.01％-2％的3-氨基丙基三乙氧基硅烷水溶液中2-24小時，在裸碳電極表面引入氨基；

b)配制蛋白質質量百分比濃度為0.01％-5％，海藻酸鈉質量百分比濃度為0.1％-5％，增強劑質量百分比濃度為0.1％-10％的混合物水溶液，靜置消泡放置于無菌容器中備用；所述的增強劑為氧化石墨烯、羧化多壁碳納米管、羧甲基殼聚糖、羧化二氧化鈦中的任意一種或兩種以上混合物；增強劑的作用一方面可以提高海藻酸鈣水凝膠的強度，另一方面也改善了其導電性能；

c)配制氯化鈣質量百分比濃度為0.1％-10％的氯化鈣水溶液；

d)將步驟b)得到的混合物水溶液，均勻地涂覆在步驟a)得到的表面引入氨基的裸碳電極上，利用氨基與海藻酸鈉上的羧基之間的相互作用使海藻酸鈉分子結合在裸碳電極表面；通過調節(jié)海藻酸鈉的質量百分比濃度調節(jié)溶液粘度，從而控制混合物水溶液的涂覆厚度為10-200微米；立即將涂覆步驟b)得到的混合物水溶液的裸碳電極浸泡到步驟c)得到的氯化鈣水溶液1-24小時，得到含蛋白質的水凝膠修飾電極；由于絲網(wǎng)印刷技術制備的裸碳電極可以做成各種形態(tài)和大小，步驟b)得到的混合物水溶液能結合到各種不同形態(tài)和大小的電極上，且厚度可控，可以用0.01-100毫升的混合物水溶液制備大小不同的水凝膠修飾電極，對于特別昂貴的蛋白質具有價格優(yōu)勢；

e)將步驟d)得到的含蛋白質的水凝膠修飾電極用洗脫液洗脫掉蛋白質，得到可識別蛋白質的分子印跡水凝膠修飾電極；以分子印跡水凝膠修飾電極作為工作電極，銀電極作為參比電極，鉑片作為輔助電極，采用循環(huán)伏安法測試蛋白質的吸附及選擇性識別性能；由于分子印跡水凝膠修飾電極上的分子印跡水凝膠可做到很薄，因此蛋白質洗脫和吸附較快，檢測時間短，靈敏度高；

f)由于在制備過程中沒有引入有毒有害試劑，沒有聚合反應熱引起蛋白質構象的變化，洗脫蛋白質的過程也比較溫和，因此步驟e)得到的可識別蛋白質的分子印跡水凝膠修飾電極生物相容性好，識別性能高，在蛋白質分析檢測領域具有良好的應用前景。

2.如權利要求1所述一種可識別蛋白質的分子印跡水凝膠修飾電極的制備方法，其特征是所述的蛋白質為牛血清蛋白、卵清蛋白、粘連蛋白、轉化生長因子、溶菌酶中的任意一種或兩種以上混合物。

3.如權利要求1所述一種可識別蛋白質的分子印跡水凝膠修飾電極的制備方法，其特征是所述的洗脫液為磷酸鹽緩沖溶液、Tris-HCl緩沖溶液、醋酸緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液中的任意一種。