[發明專利]一種鋯基金屬有機框架比色陣列傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910046219.8
• 申請日: 2019-01-17
• 公開（公告）號: CN111443049B
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 李根喜;孫召偉;吳帥;馬潔樺;潘艷紅;韓祎巍
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C08G83/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鋯基金屬有機框架和單鏈DNA修飾金納米顆粒相互作用的比色陣列傳感器的應用，其特征在于包括如下步驟：

(1)用PH＝7-7.8的Tris-HCl稀釋鋯基金屬有機框架和單鏈DNA修飾金納米顆粒至最終合適濃度；其中所述的鋯基金屬有機框架包括分子式符合UiO-66(Zr)-X物質中的一種，其中X可以為-NH₂、-NO₂、-(OH)₂、-Br、-COOH其中的一種；所述的鋯基金屬有機框架的大小為70-500nm；所述的金納米顆粒的尺寸為10-200nm；

(2)在96孔微孔板中，將一定量的不同的單鏈DNA修飾金納米顆粒分別移加到每個孔中，并通過Safire酶標儀在520nm記錄溶液的初始吸收強度為A₀；

(3)添加一定濃度的不同分析物，即多種蛋白或不同的精液樣本，在25-40℃的環境中孵育30-120分鐘；

(4)上述混合物溶液中添加一定量的鋯基金屬有機框架，25-40℃的環境中反應2-12個小時以結合并沉淀剩余的單鏈DNA修飾金納米顆粒或蛋白；

(5)將沒有沉淀的上清液小心地移加到新的96孔微量培養板中并測量反應后吸收強度，記錄為A，相對吸收強度變化，即A₀-A，用作吸光度響應變化值；

(6)記錄吸光度響應變化值，用相應的數據軟件對原始數據矩陣進行線性判別分析，從而實現對多種蛋白或不同精液樣本的檢測分析。

2.根據權利要求1所述的應用，包括鋯基金屬有機框架和單鏈DNA修飾金納米顆粒的制備方法，其特征在于：

(1)鋯基金屬有機框架的制備：利用鋯的金屬前驅體、有機配體溶解在10mL DMF中并轉移到Teflon襯里中，超聲處理后，高溫靜置反應；所述的鋯的金屬前驅體鋯的前驅體包括四氯化鋯、二氯氧化鋯、正丁醇鋯、正丙醇鋯中的至少一種，濃度為5-20mg/mL；所述的反應溫度為100-200℃；所述的反應時間為10-24小時；

(2)金納米顆粒的制備：50mL氯金酸和5mL檸檬酸三鈉混合加熱反應合成金納米顆粒；所述的氯金酸濃度為1-5mM；所述的檸檬酸三鈉濃度為20-50mM；所述的反應時間為10-60分鐘；

(3)單鏈DNA修飾金納米顆粒：將硫醇化的DNA鏈與三(2-羧乙基)膦反應激活后，與所制備的AuNPs膠體溶液一起溫育；之后，將0.1M NaCl逐步加入混合物中以“老化”，并繼續溫育；所述的單鏈DNA包括巰基修飾的Poly A、Poly T、Poly C、及A、T、C、G隨機的組合；所述的單鏈DNA的長度為5-50bp；所述的三(2-羧乙基)膦濃度為1-50mM；所述的溫育時間為5-24小時，溫育溫度為25-40℃。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的鋯基金屬有機框架和單鏈DNA修飾金納米顆粒相互作用的比色陣列傳感器可以同時對多種蛋白質進行低濃度的分析檢測。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的鋯基金屬有機框架和單鏈DNA修飾金納米顆粒相互作用的比色陣列傳感器可以同時對不同類型男性不育的精液進行分析檢測。