[發明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒嵌合毒株及其應用

有效

• 申請號: 201910046125.0
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109762792B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 姜平;張喬亞;張日騰;白娟;姜辰龍
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

本發明公開了一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒嵌合毒株及其應用，本發明以高致病性PRRSV TJM?F92疫苗弱毒株的全長感染性cDNA克隆和類NADC30亞型毒株FJ1402為基礎，利用反向遺傳技術，構建得到了豬繁殖與呼吸綜合征病毒嵌合毒株。該嵌合毒株經試驗驗證，在Marc?145細胞上病毒生長速度及病毒滴度低于其原始毒株TJM?F92，毒力低，對HP?PRRSV毒株BB0907及類NADC30毒株FJ1402均有較好的免疫保護作用，可對高致病性毒株以及類NADC30毒株感染提供有效的交叉免疫保護，為該病新型廣譜疫苗的研制奠定了重要基礎。

技術領域

本發明涉及一種新的豬繁殖與呼吸綜合征病毒嵌合毒株，還涉及該嵌合毒株株的構建方法及在制備預防豬繁殖與呼吸綜合征流行毒株的候選疫苗中的應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一種嚴重危害養豬業的病毒性疫病，其臨床癥狀復雜多樣，特征為母豬繁殖障礙或各日齡豬群的呼吸道疾病。1996年該病毒在我國首次被分離到，后逐漸遍及全國。2006年夏秋季節更是暴發高致病性PRRSV(HP-PRRSV)，其主要臨床特征為高熱、高發病率和死亡率，對養豬業造成了巨大的經濟損失。HP-PRRSV毒株相比經典PRRSV會引發仔豬更嚴重的臨床癥狀，造成更高的發病率和死亡率。PRRSV基因組容易發生變異及重組，給該病防控帶來更大的困難。

近年來，國內陸續分離到與美國PRRSV NADC30毒株同源性較高的病毒株，稱為類NADC30毒株。分子流行病學調查研究顯示，類NADC30毒株在我國已呈現流行態勢。美國NADC30毒株對仔豬致病性較弱，但與HP-PRRSV發生基因重組后的類NADC30毒株致病性明顯增強。PRRSV為單股正鏈RNA病毒，屬于動脈炎病毒科，動脈炎病毒屬。該病毒基因組全長約15kb，包含至少11個開放閱讀框(ORFs)，其中ORF1a和ORF1b編碼非結構蛋白，基因組3’端8個ORFs主要編碼病毒的結構蛋白。其中GP2，GP3，GP4和M蛋白形成的寡聚物對誘導中和抗體有一定作用。這些蛋白存在T細胞表位，可以誘導T細胞免疫。GP5由ORF5編碼，為病毒囊膜糖蛋白，又是PRRSV主要的宿主保護性抗原，包含誘導中和抗體密切相關的中和表位，GP5氨基酸序列的變異將直接降低PRRS疫苗株的交叉保護率。M蛋白是由ORF6編碼的非糖基化膜蛋白，能夠介導病毒的吸附和誘導細胞免疫。GP5和M蛋白能夠以異源二聚體的形式存在，且這種異源二聚體可以促進GP5蛋白從內質網向高爾基體轉運，從而進一步增強GP5蛋白所誘導的免疫反應。N蛋白則是一種高度保守的核衣殼蛋白，具有極強的免疫原性，但其誘導的抗體不具備中和病毒的能力。由于病毒基因組RNA突變、重組等導致毒株呈現變異多樣性及遺傳多樣化趨勢，為PRRS防控帶來了嚴峻挑戰。當前，PRRSV商品化弱毒疫苗對同源毒株基因較好免疫保護作用，但對異型毒株的交叉保護作用較低。目前，PRRS的商品化疫苗主要有弱毒活疫苗及滅活疫苗，弱毒疫苗比滅活疫苗免疫效力較好，但對不同亞型毒株交叉保護性較差。例如TJM-F92，HuN4-F112，JXA1-R和R98等弱毒疫苗可有效緩解HP-PRRSV造成的臨床癥狀，降低仔豬死亡率，但對類NADC30毒株免疫保護作用有限，因此研究新型廣譜疫苗十分必要。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明提供了一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒嵌合毒株。該新型嵌合毒株毒力低，具有良好的免疫原性，可對高致病性PRRSV毒株以及PRRSV類NADC30毒株感染提供有效的交叉免疫保護，為該病新型疫苗研制奠定了重要基礎。

本發明分離獲得了PRRSV類NADC30毒株FJ1402(簡稱類NADC30毒株FJ1402)與高致病性PRRSV毒株BB0907(簡稱HP-PRRSV BB0907)，類NADC30毒株FJ1402與HP-PRRSV BB0907致病性相近。