[發(fā)明專利]AcMYB123和AcbHLH42基因在調(diào)控獼猴桃果肉花青素合成中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910040576.3
• 申請日: 2019-01-16
• 公開（公告）號: CN109679966B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉永勝;唐維;王梨嬛;楊瑛
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/08;A01H6/20;A01H6/82
• 代理公司: 合肥昊晟德專利代理事務所(普通合伙) 34153
• 代理人: 王林

本發(fā)明公開了AcMYB123和AcbHLH42基因在調(diào)控獼猴桃果肉花青素合成中的應用，涉及植物分子基因工程技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明中的AcMYB123基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，AcbHLH42基因具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。本發(fā)明的有益效果在于：獲得紅陽獼猴桃花青素合成代謝調(diào)控的候選基因，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建重組質(zhì)粒，利用生物化學與分子生物學以及轉(zhuǎn)基因技術(shù)手段探討獼猴桃果實花青素積累的分子調(diào)控機理，為優(yōu)良獼猴桃品種的選育提供新的技術(shù)途徑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物分子遺傳與基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及AcMYB123和AcbHLH42基因在調(diào)控獼猴桃果肉花青素合成中的應用。

背景技術(shù)

獼猴桃果實富含多種營養(yǎng)成分，包括維生素、類黃酮/花青素、類胡蘿卜素、氨基酸、礦質(zhì)元素等，被譽為“Vc之王”、“水果之王”。獼猴桃已作為高價值農(nóng)作物在世界各地廣泛栽培。而中國是獼猴桃原產(chǎn)地，世界獼猴桃的分布中心，有著豐富的種質(zhì)資源。中華獼猴桃紅陽(Actinidia chinensis Planch.)是第一個商業(yè)化栽培的紅肉(因富含花青素)獼猴桃品種。因其口感好、營養(yǎng)豐富、果肉紅色，深受消費者喜愛，商業(yè)價值遠高于普通獼猴桃品種。

花青素的富集是紅陽獼猴桃果肉呈現(xiàn)紅色的原因，花青素是水溶性的植物色素，賦予花瓣和果實鮮艷的顏色，吸引動物授粉和種子傳播。花青素屬于黃酮類化合物，具很強的抗氧化能力。在植物抵御生物脅迫(病原體入侵)和非生物脅迫時(低溫、紫外損傷、缺氮)，花青素能消耗超氧離子減少氧化損傷；在動物體內(nèi)花青素可以起到抗腫瘤、預防心血管疾病，提高免疫力的作用。可見，研究獼猴桃果實花青素合成積累的調(diào)控機制具有重要的理論和實際意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題在于提供AcMYB123和AcbHLH42基因在調(diào)控獼猴桃果肉花青素合成中的應用，從而調(diào)控果肉花青素的積累。

本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的：

AcMYB123和AcbHLH42基因在調(diào)控獼猴桃果肉花青素合成中的應用，所述AcMYB123基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述AcbHLH42基因具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

優(yōu)選的，所述AcbHLH42基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述AcbHLH42基因編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

優(yōu)選的，所述AcMYB123和AcbHLH42基因均分離自紅陽獼猴桃內(nèi)外果肉。

優(yōu)選的，所述AcMYB123和AcbHLH42基因的真核重組質(zhì)粒為pHB-AcMYB123/AcbHLH42。

優(yōu)選的，所述pHB-AcMYB123/AcbHLH42重組質(zhì)粒為雙基因重組質(zhì)粒，將AcMYB123與AcbHLH42全長基因分別構(gòu)建在過表達載體的pHB載體的MCS區(qū)域與原Bar區(qū)。

優(yōu)選的，所述AcMYB123基因和所述AcbHLH42基因在調(diào)控獼猴桃果肉花青素合成中的應用，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建雙基因重組質(zhì)粒pHB-AcMYB123/AcbHLH42；

(2)經(jīng)PCR酶切驗證正確后形成35S::AcMYB123+35S::AcbHLH42，并轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌；

(3)采用瞬時或農(nóng)桿菌介導的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化法，將雙基因重組質(zhì)粒pHB-AcMYB123/AcbHLH42導入獼猴桃、煙草或擬南芥中。

優(yōu)選的，所述雙基因重組質(zhì)粒pHB-AcMYB123/AcbHLH42質(zhì)粒的構(gòu)建方法為將AcMYB123與AcbHLH42全長基因分別構(gòu)建在過表達載體的pHB載體的MCS區(qū)域與原Bar區(qū)。

本發(fā)明的有益效果在于：