[發明專利]一種用于非洲豬瘟病毒LAMP檢測的引物組、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 201910036166.1
• 申請日: 2019-01-15
• 公開（公告）號: CN109628644A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 王學慶;李鵬云;王楠
• 申請（專利權）人: 許昌佰柯蛋白與基因工程研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 代芳

1.一種用于非洲豬瘟病毒LAMP檢測的引物組，所述引物組包括外引物F3、B3和內引物FIP、BIP；所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一種用于非洲豬瘟病毒LAMP檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述引物組。

3.根據權利要求2所示的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括10×buffer、Bst DNA聚合酶、穩定劑、MnCl₂、4-(2-吡啶偶氮)間苯二酚和DEPC水。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述穩定劑為甜菜堿溶液；所述甜菜堿溶液中甜菜堿的濃度為4～6M。

5.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括陽性對照品和陰性對照品。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品為非洲豬瘟病毒基因組DNA；所述陰性對照品為雙蒸水。

7.權利要求1所述的引物組或權利要求2～6任意一項所述的試劑盒在非診斷目的的非洲豬瘟病毒LAMP檢測中的應用，其特征在于，所述應用包括以下步驟：

1)提取待測非洲豬瘟病毒的基因組DNA；

2)以待測非洲豬瘟病毒DNA的基因組DNA為模板，利用權利要求1所述引物組中的外引物F3、B3和內引物FIP、BIP，進行LAMP擴增反應，獲得LAMP擴增產物；

3)觀察反應液顏色，若反應液呈黃色，檢測為非洲豬瘟病毒陽性；若反應液呈橙紅色，檢測結果為非洲豬瘟病毒陰性。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟2)中所述LAMP擴增反應使用的反應體系以25μL計包括：待測非洲豬瘟病毒的基因組DNA2μL，引物組5μL，10×buffer 2.5μL，8UBst DNA聚合酶1μL，穩定劑1.5μL，MnCl₂1.25μL，4-(2-吡啶偶氮)間苯二酚1.25μL和DEPC水10.5μL；

所述10×buffer包括以下終濃度的成分：dNTPs14mM，MgSO₄20mM，Tris-HCl 200mM，(NH₄)₂SO₄100mM，100mM KCl；以2.5μL計，所述10×buffer還包括0.025μL的Tween20；

所述引物組由以下終濃度的成分組成：外引物F3和B3的濃度獨立為0.2μM，內引物FIP和BIP濃度獨立為1.6μM；

所述LAMP擴增反應的程序為：55～60℃恒溫45～55min。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述LAMP擴增反應的程序為：58℃恒溫50min。