[發(fā)明專利]十四元大環(huán)內(nèi)酯類化合物、其制備方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910034128.2
• 申請日: 2019-01-15
• 公開（公告）號: CN109651329B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王繼棟;符格意;張輝;齊歡;鄧愛文;黃雋;吳敏
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海正藥業(yè)股份有限公司;浙江大學(xué)
• 主分類號: C07D313/00
• 分類號: C07D313/00;C07D493/08;C07D493/18;C12P17/08;C12P17/18;A61K31/365;A61P35/00;C12R1/29
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1.十四元大環(huán)內(nèi)酯類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如(I)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示：

2.一種制備如權(quán)利要求1所述的十四元大環(huán)內(nèi)酯類化合物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)在包含碳源和氮源的培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)小單孢菌，并收集發(fā)酵液；

(2)將步驟(1)收集得到的發(fā)酵液，分離得到菌絲體和上清液，菌絲體經(jīng)過有機溶劑A提取得到提取液；上清液經(jīng)樹脂吸附，然后用有機溶劑B洗脫得到洗脫液；合并提取液和洗脫液，得合并液；

(3)將步驟(2)所得合并液，依次經(jīng)過濃縮、萃取、濃縮、硅膠柱層析、凝膠柱層析后得到含有十四元大環(huán)內(nèi)酯類化合物的流分樣品；

(4)將步驟(3)中得到的流分樣品進行反相柱層析得到十四元大環(huán)內(nèi)酯類化合物(I)、(Ⅱ)或(Ⅲ)；

其中，

步驟(1)中所述的小單孢菌為Micromonospora sp.HM134，菌種保藏于CGMCC，其保藏編號為CGMCC No.15401；

步驟(2)中所述有機溶劑A選自丙酮、C₁-C₃醇或它們的混合物；所述有機溶劑B選自丙酮、C₁-C₃醇或它們的混合物；

步驟(3)中所述硅膠柱層析所使用的洗脫溶劑為100:0-80:20(V/V)的C₅-C₈烷烴和脂肪酸酯混合溶劑系統(tǒng)；所述凝膠柱層析所使用的洗脫溶劑為90:10-10:90(V/V)的氯代烷烴和C₁-C₃醇的混合溶劑系統(tǒng)；

步驟(4)中所述反相柱層析所使用的洗脫溶劑選自乙腈、甲醇、乙腈的水溶液、甲醇的水溶液或者甲醇與乙腈的混合溶劑的水溶液，所述乙腈的水溶液中乙腈與水的體積比＝30:70-100:0，所述甲醇的水溶液中甲醇與水的體積比＝30:70-100:0，所述甲醇與乙腈的混合溶劑的水溶液中甲醇與乙腈的混合溶劑與水的體積比＝30:70-100:0。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中步驟(1)所述的碳源選自葡萄糖、可溶性淀粉、糊精、玉米淀粉、工業(yè)糖蜜、甘油、蔗糖、山梨醇、甘露醇、乳糖、麥芽糖、木聚糖或上述兩種或多種物質(zhì)的組合；所述的氮源選自酵母粉、酵母抽提物、黃豆餅粉、大豆粉、花生餅粉、棉籽餅粉、麥芽抽提物、蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、玉米漿干粉、麩皮、麩質(zhì)粉、尿素、銨鹽或上述兩種或多種物質(zhì)的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中步驟(1)所述的碳源選自可溶性淀粉與葡萄糖組合；所述的氮源選自黃豆餅粉、酵母抽提物或它們的組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中步驟(2)中所述樹脂為大孔吸附樹脂，所述有機溶劑A選自丙酮、甲醇、乙醇或者它們中的兩種或多種的組合；所述有機溶劑B選自丙酮、甲醇、乙醇或者它們中的兩種或多種的組合。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中步驟(2)中所述樹脂為HP-20大孔吸附樹脂。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中步驟(3)中所述的硅膠柱層析所使用的硅膠粒徑選自100-200目，所述硅膠柱層析所使用的洗脫方式為梯度洗脫，所述C₅-C₈烷烴選自正庚烷、正己烷或它們的混合物，所述脂肪酸酯為乙酸乙酯。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中步驟(3)中所述硅膠柱層析所使用的洗脫方式為正庚烷:乙酸乙酯＝100:0-80:20(V/V)梯度洗脫；或為正己烷:乙酸乙酯＝100:0-80:20(V/V)梯度洗脫。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中步驟(3)中所述的凝膠柱層析所使用的凝膠為凝膠LH-20，所述凝膠柱層析所使用的洗脫方式為等度洗脫；所述氯代烷烴選自氯仿、二氯甲烷或它們的混合物，所述C₁-C₃醇選自甲醇、乙醇或它們的混合物。