[發(fā)明專利]一種楊梅菌種馴化方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910030652.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN109609429A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 扶明明;何名芳;張紅宇;丁小禮;甘易華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 扶明明
• 主分類號(hào): C12N1/36
• 分類號(hào): C12N1/36;C12N1/18;C12N11/10;C12N11/08;C12G3/024;C12R1/865
• 代理公司: 重慶市信立達(dá)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

1.一種楊梅菌種馴化方法，其特征在于，所述楊梅菌種馴化方法將葡萄酒酵母從斜面試管分別接種到不同濃度梯度楊梅汁的培養(yǎng)基當(dāng)中，在30℃下培養(yǎng)2天，觀察氣泡產(chǎn)生情況，采用血球計(jì)數(shù)法測(cè)菌體濃度，取楊梅原汁濃度較高且菌體濃度大的稀釋涂平板，楊梅汁中加2％營養(yǎng)瓊脂，制成固體培養(yǎng)基，30℃下培養(yǎng)，挑取最大盡量菌落，不斷重復(fù)以上操作，直至出現(xiàn)酵母在較高濃度楊梅汁中起酵時(shí)間在24小時(shí)以內(nèi)的，取發(fā)酵液稀釋涂平板，挑取大菌落涂斜面保存。

2.如權(quán)利要求1所述的楊梅菌種馴化方法，其特征在于，所述楊梅菌種馴化方法包括以下步驟：

(1)配制楊梅汁質(zhì)量比含量20％、4-6°Bx麥汁質(zhì)量比含量80％的培養(yǎng)液100ml，加入活化的酵母10ml，在30℃溫度下培養(yǎng)，前12小時(shí)通氧3次，每4小時(shí)通一次；12小時(shí)后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡，檢測(cè)酵母濃度大于2.5×10⁸個(gè)/ml時(shí)，進(jìn)行下一步操作；

(2)配制楊梅汁質(zhì)量比含量40％、4-6°Bx麥汁質(zhì)量比含量60％，調(diào)整糖度至20°Bx的培養(yǎng)液100ml，加入培養(yǎng)的酵母10ml，在30℃溫度下培養(yǎng)，前16小時(shí)每4小時(shí)通氧一次；16小時(shí)后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡，檢測(cè)酵母濃度大于2.5×10⁸個(gè)/ml時(shí)，進(jìn)行下一步操作；

(3)配制楊梅汁質(zhì)量比含量60％、4-6°Bx麥汁含量40％，調(diào)整糖度至20°Bx的培養(yǎng)液100ml，加入培養(yǎng)的酵母10ml，在30℃溫度下培養(yǎng)，前20小時(shí)每4小時(shí)通氧一次；20小時(shí)后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡，檢測(cè)酵母濃度大于2.5×10⁸個(gè)/ml時(shí)，進(jìn)行下一步操作；

(4)配制楊梅汁含質(zhì)量比量80％、4-6°Bx麥汁含質(zhì)量比量80％，調(diào)整糖度至20°Bx的培養(yǎng)液100ml，加入培養(yǎng)的酵母10ml，在30℃溫度下培養(yǎng)，前24小時(shí)每4小時(shí)通氧一次；24小時(shí)后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡，檢測(cè)酵母濃度大于2.5×10⁸個(gè)/ml時(shí)，進(jìn)行下一步操作；

(5)配制楊梅汁質(zhì)量比含量100％，調(diào)整糖度至20°Bx的培養(yǎng)液100ml，加入上一步驟培養(yǎng)的酵母10ml，在30℃溫度下培養(yǎng)，前28小時(shí)每4小時(shí)通氧一次；28小時(shí)后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡，檢測(cè)酵母濃度大于2.5×10⁸個(gè)/ml時(shí)，進(jìn)行下一步操作；

(6)將所得酵母培養(yǎng)液在無菌條件下1000r/min離心10min，傾去上清液，用無菌生理鹽水洗滌菌體，再離心得濕菌體，加入無菌水制成菌懸液；

(7)配制2％海藻酸鈉和6％聚乙烯醇混合載體溶液滅菌冷卻后，與菌懸液混合均勻，凝膠內(nèi)包埋菌量大于4.7×10⁷cfu/ml，用注射器將其注入交聯(lián)劑CaCl₂溶液中，形成小球，在交聯(lián)劑中硬化4h，用無菌水洗滌；

(8)將步驟(7)中配制的包埋菌小球10個(gè)，置于100ml楊梅汁質(zhì)量比含量100％、糖度20°Bx的培養(yǎng)液中，在30℃溫度下培養(yǎng)，前12h每4小時(shí)通氧一次，12h后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡；

(9)破碎步驟(8)包埋菌小球，放置于楊梅汁質(zhì)量比含量100％，調(diào)整糖度至20°Bx的培養(yǎng)液100ml中，在30℃溫度下培養(yǎng)，前28小時(shí)每4小時(shí)通氧一次；28小時(shí)后停止通氧，培養(yǎng)至出現(xiàn)大量氣泡，檢測(cè)酵母濃度大于2.5×10⁸個(gè)/ml；

(10)重復(fù)步驟(6)、(7)、(8)、(9)，直至制作的包埋菌小球能在24h內(nèi)起酵，產(chǎn)生酒精，即為馴化完成。

3.如權(quán)利要求2所述的楊梅菌種馴化方法，其特征在于，楊梅汁的制取包括：

⑴、原料的選擇：以自然落地楊梅果為主，也可以是新鮮熟楊梅，去除腐敗、過熟、變質(zhì)的楊梅果；

⑵、浸泡：把清理好的新鮮楊梅放入3％的食鹽水中浸泡約15至20分鐘；

⑶、清洗：把浸泡過的楊梅放在純水中清洗2－3分鐘以去除食鹽；

⑷、去核、取汁：利用楊梅取汁機(jī)對(duì)浸泡好的楊梅去核打漿；分兩步對(duì)楊梅果漿進(jìn)行過濾，即先利用濾孔大小約0.5mm的振動(dòng)篩對(duì)楊梅果漿進(jìn)行粗濾，再利用紗布對(duì)粗濾好的果漿進(jìn)行精濾。