[發明專利]蘇金單抗制品中半胱氨酸化變異體的去除方法

有效

• 申請號: 201910029571.0
• 申請日: 2019-01-14
• 公開（公告）號: CN109369806B
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 歐陽子均;湯沛霈;李綱;楊澤軍;夏愛坤
• 申請（專利權）人: 邁威（上海）生物科技有限公司;上海德思特力生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C07K1/18
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 張偉

1.一種用于去除蘇金單抗制品中半胱氨酸化變異體的方法，所述方法包括，使所述蘇金單抗制品經受陰離子交換層析，其中，所述蘇金單抗制品包含哺乳動物細胞重組產生的蘇金單抗，所述方法包括：

1) 以復合型陰離子交換層析填料裝柱，使用5-50 mM Tris-HCl緩沖液，pH 8.9平衡層析柱至基線平，其中所述復合型陰離子交換層析填料為Capto^TM adhere ImpRes填料或Bestarose Diamond MMA填料；

2) 將含所述蘇金單抗的上樣液調pH值至8.5±0.1，上樣，使用5-50 mM Tris-HCl緩沖液，pH 8.9平衡所述層析柱至基線平，所述上樣液為重組產生蘇金單抗的哺乳動物細胞的培養上清液，或者為所述培養上清液的經純化部分；

3) 以流動相A和流動相B進行線性梯度洗脫，其中流動相A為5-50 mM Tris-HCl緩沖液，pH 8.9，流動相B為10-100 mM Tris-HCl緩沖液，pH 7.1，線性梯度洗脫包括：70-0%的流動相A和30%-100%的流動相B洗脫至少20個柱體積（CV），其中100%的流動相B洗脫至少8個CV，通過監測A280處的吸光度在蛋白出峰后收集洗脫級分；

并且，分別控制步驟2)中所述上樣液和步驟3)中所述流動相的流速，使得第一個洗脫峰的保留時間大于3分鐘。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述Tris-HCl緩沖液為25 mMTris-HCl緩沖液，pH 8.9。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，上樣量為不高于60 mg所述蘇金單抗/mL所述填料。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，上樣量為不高于50 mg所述蘇金單抗/mL所述填料。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，使用步驟1)中的Tris-HCl緩沖液平衡所述層析柱至基線平。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述流動相A為25 mM Tris-HCl緩沖液，pH 8.9，所述流動相B為50 mM Tris-HCl緩沖液，pH 7.1。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述線性梯度洗脫包括：以70-0%的流動相A和30%-100%的流動相B洗脫20個CV，其中100%的流動相B洗脫8個CV。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

1) 以Capto^TM adhere ImpRes填料或Bestarose Diamond MMA填料裝柱，使用25 mMTris-HCl緩沖液，pH 8.9平衡層析柱至基線平；

2) 將含所述蘇金單抗的上樣液調pH 8.5±0.1，以不高于60 mg所述蘇金單抗/mL所述Capto^TM adhere ImpRes填料或不高于50 mg所述蘇金單抗/mL所述Bestarose Diamond MMA填料上樣，再次使用25 mM Tris-HCl緩沖液，pH 8.9平衡所述層析柱至基線平；

3) 以流動相A和流動相B進行線性梯度洗脫，其中流動相A為25 mM Tris-HCl緩沖液，pH 8.9，流動相B為50 mM Tris-HCl緩沖液，pH 7.1，以70-0%的流動相A和30%-100%的流動相B洗脫20個CV，其中100%的流動相B洗脫8個CV，期間監測A280處的吸光度，在蛋白出峰后，當A280處的吸光度大于100mAu開始收集洗脫級分，小于100mAu停止收集。

9.一種蘇金單抗的制備方法，所述制備方法包括，使哺乳動物細胞表達蘇金單抗，收獲細胞培養上清液并可選地進行細胞培養上清液的純化，然后使所述細胞培養上清液或其經純化部分經受權利要求1至8中任一項所述的方法。