[發明專利]一種谷子籽粒葉酸提取方法及葉酸含量的測定方法

在審

• 申請號: 201910026212.X
• 申請日: 2019-01-11
• 公開（公告）號: CN109633029A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 侯思宇;韓淵懷;閆陸飛;宋敏;高豪;孫朝霞
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種谷子籽粒葉酸提取方法及谷子籽粒中葉酸含量的測定方法，屬于雜糧品質分析技術領域，提供了一種利用”三酶法”提取谷子籽粒葉酸，建立高效液相色譜法測定其葉酸含量，對谷子葉酸品質性狀進行評價，所采用的技術方案為a、選擇谷子品種‘大白谷’，該品種為山西省主栽品種，生產性狀較好；b、利用三酶法對谷子品種進行前處理，并通過高相液相色譜進行檢測，本發明對豐富谷子種質資源，提高育種質量，推進谷子品質育種工作具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種谷子籽粒葉酸提取方法及葉酸含量的測定方法，屬于雜糧品質分析技術領域。

背景技術

谷子（學名：Setaria italica）是一種重要的小雜糧作物，有“小雜糧之首”的美譽。谷子脫殼后即為“小米”，是深受北方地區人們喜愛的食品，其籽粒富含多種對人體有益的蛋白質，脂肪及維生素。隨著人們在日常飲食營養攝入多樣性的需求下，谷子作為功能性食品受到人們和科學家的關注。

葉酸（Folic acid）又稱蝶酰谷氨酸，是由蝶呤、對氨基苯甲酸和谷氨酸殘基組成的一種重要的水溶性B族維生素（B9）。葉酸在人類營養和健康方面具有重要的作用：①葉酸可以調節胚胎神經細胞發育防止新生嬰兒患先天性神經管缺陷癥；②作為精神病人的輔助治療劑從而緩解精神分裂癥；③治療慢性萎縮性胃炎以及防治心肌損傷和心肌梗塞等疾病。由于人類不能自身合成葉酸, 葉酸的補充主要來源于食物攝取。而主糧作物中葉酸的含量通常較低, 如玉米中平均含量約為0.19 μg/g，水稻約為0.09 μg/g，小麥約為0.26 μg/g而小米中含有豐富葉酸，是主糧作物的5～25倍（平均1.6 μg/g）。因此獲得小米中總葉酸及各葉酸衍生物含量的穩定可靠數據，進而對小米品質進行深入研究，對高品質小米產品開發利用都具有較高的理論和實踐價值。

發明內容

為解決現有技術存在的技術問題，本發明提供了一種谷子籽粒葉酸提取方法及葉酸含量的測定方法，其操作簡單，利用三酶法提取和高校液相色譜法測定，獲得谷子籽粒中葉酸的含量。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為一種谷子籽粒葉酸提取方法，按照以下步驟進行操作，以下步驟均在弱光條件下進行，

a、將脫殼后的小米放在60℃烘箱中烘干水分，用研磨機研磨成粉末，并過100目篩子備用；

b、配置終濃度為0.05mol/L的葉酸提取液；

c、稱取0.3g小米粉，分別放置于2mL EP離心管中，然后分別再加入1000μL的葉酸提取液，形成勻漿液；

d、在上述勻漿液中加入20μL α-淀粉酶，振蕩混勻后，室溫下靜置40min；

e、向離心管中再加入150μL蛋白酶，振蕩混勻后，37℃恒溫培養箱孵育1h；

f、取出后，水浴煮沸10min，然后再冰浴迅速冷卻10min，再于14000rpm，4℃離心20min；

g、吸取上清，并加入大鼠血清，振蕩混勻后，37℃恒溫培養箱培養2h；

h、取出后，重復步驟f；

i、吸取上清至300μL內插管中，并裝于棕色進樣瓶中。

優選的，所述步驟b中葉酸提取液用磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉配置，并加入1%的抗壞血酸鈉鹽及0.1% β-巰基乙醇，pH值為6.5。

優選的，所述步驟g中加入的大鼠血清占體積分數的2%。

優選的，所述步驟a中選擇谷子品種‘大白谷’，該品種為山西省主栽品種。