[發明專利]木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉及其應用

在審

• 申請號: 201910024769.X
• 申請日: 2019-01-10
• 公開（公告）號: CN109517744A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 劉銅;侯巨梅
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;A01N63/04;A01P3/00;A01P21/00;C09K17/14;C12R1/885
• 代理公司: 哈爾濱東方專利事務所 23118
• 代理人: 曹愛華

本發明涉及的是木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉及其應用，其中的木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉通過以下方法制備而成：一、菌株活化和孢子懸浮液制備；二、固體種子制備：分別制備綠色木霉菌固體種子、哈茨木霉固體種子和棘孢木霉固體種子，然后按質量比1:1:1的比例混合綠色木霉菌固體種子發酵物、哈茨木霉固體種子發酵物和棘孢木霉固體種子發酵物，最終得到混合菌種子；三、混合菌種子固體圓盤發酵；四、復合孢子粉獲得。本發明采用混合菌種子固體發酵工藝，獲得三種木霉菌復合孢子粉，可以有效抑制土壤有害菌、改良重茬地和鹽堿地和促進植物生長，減少化肥農藥的使用。

一、技術領域

本發明涉及的是農作物病害防治的微生物菌劑，具體涉及木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉及其應用。

二、背景技術

國內外生物防治產品開發的重要發展趨勢是由單一菌種發酵向混菌發酵方向發展，利用不同微生物的功能特性，通過多種菌株的協同作用，提高菌株的生物量和功能特性、簡化生產工藝、減少發酵批次、提高發酵效率及縮短發酵周期，使其開發的產品具有功能和機制互補。

木霉屬于半知菌門，絲孢目，木霉屬。是一類分布廣、繁殖快、具有較高生防價值且對一些廣譜性殺菌劑不敏感的生防有益真菌，具有適應性強、抗菌譜廣的特點，還能促進植物生長，具有重寄生作用、競爭作用、產生裂解酶、產生拮抗化合物，抑制或殺死病原菌、誘導寄主植物對病菌的防衛反應等作用方式，具有重要的經濟意義。不同木霉菌種其功能存在一些差異，例如哈茨木霉和康寧木霉可以刺激植物生長，抑制大多數病原菌的生長；綠色木霉（Trichoderma viride TV97）可以促進土壤中的不可溶的磷溶解，提高植物對磷的吸收；里氏木霉則是是纖維素酶生產菌，可以促進秸稈纖維素的降解。然而目前我國木霉生防產品基本通過單一菌種發酵所得或者單一菌種發酵后進行混合復配所得，導致產品功能單一、發酵批次多，成本提高。因此急需擴大木霉菌的產品種質資源，開發廉價發酵工藝，利用各功能菌的協同增效作用，通過混菌發酵來實現木霉復合高效菌劑的生產，復合菌劑是多種木霉菌種構成，在功能和機制上起到互補的效果，有效抑制土壤有害菌、改良重茬地和鹽堿地和促進植物生長，減少化肥農藥的使用。

三、發明內容

本發明的一個目的是提供了木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉，這種木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉用于解決木霉生防產品通過單一菌種發酵所得或者單一菌種發酵后進行混合復配所得，導致產品功能單一、發酵批次多，成本高的問題，本發明的另一個目的是提供這種木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉的應用。

為了實現上述目的，本發明采用的具體技術方案如下：這種木霉菌混菌協同固體發酵制備的復合孢子粉通過以下方法制備而成：

步驟一、菌株活化和孢子懸浮液制備

將綠色木霉菌、哈茨木霉菌和棘孢木霉菌分別在PDA培養基上活化，28℃培養48-96 h，分別用滅菌蒸餾水洗下分生孢子，制成各自的孢子懸浮液，孢子懸浮液中孢子數為10⁶-10⁸個／mL；

步驟二、固體種子制備

將麩皮、木薯渣、甘蔗渣、玉米粉按質量比6.8:1.2:1:1的比例混合成種子發酵物料，然后將種子發酵物料和水按質量比1:1攪拌均勻后，分別裝入三個500mL塑料瓶，裝入量均為塑料瓶高的1/5，然后再121℃高壓濕熱滅菌20-30 min，冷卻后，將步驟一制備的孢子懸浮液分別按0.2-2%接種量接入所述三個塑料瓶中，上下搖均勻，放在溫度28℃，濕度80％條件下培養5-7d；分別制備成綠色木霉菌固體種子、哈茨木霉固體種子和棘孢木霉固體種子，然后按質量比1:1:1的比例混合綠色木霉菌固體種子發酵物、哈茨木霉固體種子發酵物和棘孢木霉固體種子發酵物，最終得到混合菌種子；

步驟三、混菌固體圓盤發酵