[發(fā)明專利]抗豬戊型肝炎病毒ORF2蛋白單克隆抗體及其制備與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910023151.1
• 申請(qǐng)日: 2019-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN109593122A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙欽;孫亞妮;周恩民;陳宜陽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/085
• 分類號(hào): C07K14/085;C07K16/10;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/576;C12R1/91
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 戴鳳儀

本發(fā)明公開一種抗豬戊型肝炎病毒ORF2蛋白單克隆抗體及其制備與應(yīng)用，主要涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，該單克隆抗體主要由雜交瘤細(xì)胞株1E4分泌，利用原核表達(dá)純化的豬戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端267個(gè)氨基酸為包被抗原，針對(duì)該區(qū)域的親和層析純化的單克隆抗體mAb?1E4為阻斷抗體，通過HRP標(biāo)記的特異性單克隆抗體，使其能夠通過HRP的底物TMB或DAB直接檢測(cè)到該單克隆抗體，并應(yīng)用于制備檢測(cè)豬戊型肝炎病毒的藥物中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種抗豬戊型肝炎病毒ORF2蛋白單克隆抗體及其制備與應(yīng)用。

背景技術(shù)

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)屬戊型肝炎病毒科戊型肝炎病毒屬，是通過消化道傳播的無包膜單股正鏈RNA病毒。戊型肝炎雖然是自限性疾病，但其病死率高于甲型與乙型肝炎，在孕婦中甚至可達(dá)20％-30％。

哺乳動(dòng)物HEV主要分為4個(gè)基因型，但僅有一個(gè)血清型。其中基因3型和4型HEV為人畜共患病毒，豬和野鹿是其主要的自然儲(chǔ)存宿主。目前已有關(guān)于人誤食了HEV感染的豬和野鹿食品而感染暴發(fā)戊型肝炎病例的報(bào)道。除了豬以外，其他已知的動(dòng)物源宿主還包括禽類、大鼠、兔、貓鼬、山羊，潛在的動(dòng)物宿主包括狗、貓、猴等。

豬HEV不穩(wěn)定易降解，難以從載毒標(biāo)本中分離，而迄今為止仍沒有有效的細(xì)胞培養(yǎng)模型。因此，對(duì)該病毒感染的診斷主要是通過病毒RNA的核酸檢測(cè)和血清中抗病毒抗體的檢測(cè)。目前，識(shí)別豬HEV衣殼蛋白的抗體報(bào)道較少。僅有少數(shù)幾株單抗，其識(shí)別構(gòu)象表位，主要應(yīng)用于病毒感染宿主細(xì)胞后病毒的檢測(cè)，并發(fā)現(xiàn)具有一定的中和效應(yīng)。但是上述單抗是應(yīng)用人HEV衣殼蛋白作為免疫原制備的，其對(duì)豬HEV衣殼蛋白的親和力仍有待深入的研究。

目前對(duì)于豬血清中HEV抗體的檢測(cè)多用間接ELISA，其要求高純度的包被抗原并極易產(chǎn)生非特異性結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)豬戊型肝炎病毒ORF2蛋白的單克隆抗體制備及應(yīng)用方法，利用阻斷ELISA檢測(cè)豬血清中抗HEV抗體，從而提高對(duì)豬血清中抗HEV抗體檢測(cè)的特異性和靈敏性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

本發(fā)明提供一種豬戊型肝炎病毒中國(guó)山東分離株(Hepatitis E virus,HEV,CHN-SD-sHEV,GenBank number KF176351)衣殼蛋白，所述蛋白由豬戊型肝炎病毒中國(guó)山東分離株的ORF2蛋白C端267個(gè)氨基酸構(gòu)成，其氨基酸序列(QLFYSRPVVSANGEPTVKLYTSVENAQQDKGIAIPHDIDLGESRVVIQDYDNQ HEQDRPTPSPAPSRPFSVLRANDVLWLSLTAAEYDQTTYGSSTNPMYVSGTVTFVNVATGAQGVSRSLDWSKVTLDGR PLTTIQQYSKTFYVLPLRGKLSFWEAGTTKAGYPYNYNTTASDQILIENAAGHRVCISTYTTNLGSGPVSIAAVGVLA PHTALAVLEDTVDYPARAHTFDDFCPECRALGLQGCAFQSTVAELQRLKMKVGKTREY.)與SEQ ID NO.1相同。

本發(fā)明還提供一株分泌抗豬戊型肝炎病毒ORF2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，所述雜交瘤細(xì)胞株命名為1E4，微生物保藏號(hào)為：CCTCC NO:C2018250；保藏單位為：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏單位地址湖北武漢，武漢大學(xué)。

作為本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了一種雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，識(shí)別豬HEV ORF2蛋白序列上第625至628個(gè)氨基酸(⁶²⁵EPTV⁶²⁸)命名為1E4。

優(yōu)選的，對(duì)所述單克隆抗體進(jìn)行辣根過氧化物酶的標(biāo)記，命名為HRP-1E4。